Elettroporazione di singole cellule in colture organotipiche di fette di cervello: una tecnica in vitro per fornire plasmidi all'interno di neuroni mirati in fette di ippocampo cerebrale

Iniziare l'elettroporazione prelevando una pipetta di vetro contenente la soluzione plasmidica desiderata. Fissarlo a un supporto per micropipette dotato di un elettrodo a filo d'argento, assicurandosi che l'elettrodo sia inserito nella micropipetta. Prendi una camera di elettroporazione contenente una sezione ippocampale ultrasottile immersa nel liquido cerebrospinale artificiale.

Immergere l'elettrodo di terra nel fluido presente nella camera per la successiva elettroporazione. Abbassare il puntale della pipetta nella camera di elettroporazione e registrare la resistenza di base. Utilizzare un microscopio per posizionare la punta della pipetta vicino alla cellula target. Una volta che la pipetta è a contatto con la membrana neuronale, la sua resistenza aumenta notevolmente.

Applicare una pressione positiva dell'aria per creare una piccola invaginazione nella membrana neuronale. Applicare rapidamente una leggera aspirazione per spingere la membrana verso l'alto, creando una tenuta allentata tra il puntale della pipetta e la membrana. Ripetere questo processo ancora un paio di volte per condizionare la membrana ed evitare la lisi cellulare.

Dopo il condizionamento, applicare una fo