Isolamento dei neuroni del midollo spinale: una procedura di gradiente di densità per isolare i neuroni del midollo spinale neonatale per studi in vitro
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0 visualizzazioni • 6:10 min. • December 22nd, 2025
[INSERIRE FIGURE1 QUI]
Figura 1: Colonna vertebrale sezionata e midollo spinale rilasciato da un topo neonatale di 3 giorni. La freccia in (a) punta verso l'estremità caudale della colonna vertebrale, dove viene inserito un ago per rilasciare il midollo spinale. Un midollo spinale rilasciato (b) viene mostrato immerso nel PBS.
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Figura 2: Gradiente di densità, con l'aggiunta di cellule dopo la centrifu
Per isolare i neuroni del midollo spinale, prendere una colonna vertebrale di un topo neonatale e posizionarla su una capsula di Petri. Lavare la colonna vertebrale con un tampone salino per rilasciare il midollo spinale. Trasferire il midollo spinale in un mezzo neuronale freddo per promuovere la sopravvivenza cellulare.
Quindi, tritare il midollo spinale e trasferire i frammenti in un tubo contenente terreno neuronale fresco. Incubare la provetta in un bagnomaria shaker per l'acclimatazione. Dopo l'incubazione, rimuovere il terreno esaurito e aggiungere il terreno di digestione. Gli enzimi digestivi scindono la matrice tissutale per sciogliere le cellule.
Eseguire la triturazione aspirando i frammenti di tessuto nella pipetta e svuotare rapidamente i componenti, rilasciando le singole cellule in sospensione. Quindi, trasferire questa sospensione in una provetta contenente un mezzo di gradiente di densità e centrifugare.
Dopo la centrifugazione, lo strato superficiale della provetta contiene detriti di tessuto. Il primo strato comprende oligodendrociti e astrociti. Il secondo e il terzo strato comprendono i neuroni, con il terzo strato che ha la purezza più elevata. Infine, il pel
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