Generazione di un modello murino di infarto del miocardio: una procedura chirurgica per la legatura permanente dell'arteria coronaria discendente anteriore sinistra in un modello murino

Per iniziare, prepara un topo anestetizzato in posizione supina. Fai un'incisione longitudinale nel suo collo e sposta le ghiandole salivari. Successivamente, separa la fascia, uno strato di tessuto connettivo che circonda i muscoli della cinghia, per rivelare la trachea sottostante.

Attraverso la bocca, inserire una cannula per l'intubazione e confermare l'inserimento tracheale accurato attraverso l'incisione. Collegare la cannula al ventilatore impostato sui parametri desiderati, che forniscono un'adeguata ventilazione al mouse.

Ora, posiziona il mouse in una posizione di decubito laterale destro. Incidere la pelle tra i muscoli pettorali sinistri e separare la fascia. Impostare il ventilatore sulla pressione positiva di fine espirazione o sull'impostazione PEEP.

Eseguire una toracotomia sul lato sinistro nel terzo spazio intercostale - un'incisione praticata tra la terza e la quarta costola. La pressione positiva nelle vie aeree durante la modalità PEEP evita il collasso alveolare durante la toracotomia.

Dopo aver effettuato l'accesso al cuore, rimuovere il pericardio. Identificare l'arteria coronaria discendente anteriore sinistra o LAD, un vaso rosso vivo che si dirama dall'arteria coronaria sinistra. L'arteria LAD fornisce sangue alla maggior parte del ventricolo sinistro.

Legare chirurgicamente l'arteria LAD prossimale agli atri sinistri. Questa legatura dell'arteria LAD provoca il pallore del ventricolo. Chiudere l'incisione. Rimetti l'animale nella sua gabbia. La legatura permanente dell'arteria LAD ostruisce il flusso sanguigno e l'apporto di ossigeno ai muscoli cardiaci, provocandone il danneggiamento e la morte.

Usa un rasoio elettrico per radere rapidamente un topo maschio C57BL/6 anestetizzato da 25 a 30 grammi sulla gola e sul lato sinistro della gabbia toracica. Confermare la mancanza di risposta al pizzicamento delle dita. Applicare un unguento sugli occhi dell'animale. Posiziona il mouse in posizione supina su un termoforo e posiziona un piccolo impacco di garza sotto la testa per evitare di surriscaldare gli occhi.

Fissare gli arti con del nastro adesivo. Passare un anello di sutura di seta 5-0 sotto gli incisivi superiori e fissare l'estremità del cappio sul termoforo per mantenere la bocca aperta durante l'incannulamento. Applicare la crema depilatoria sulle zone pre-rasate e massaggiare delicatamente con un batuffolo di cotone per 1 minuto.

Rimuovere il pelo in eccesso e la crema con una garza e pulire la pelle esposta con gocce di soluzione salina allo 0,9% e garza. Applicare pezzi di garza sterile sulla gola e sul torace rasati e immergere la garza con iodopovidone. Impostare il ventilatore a un volume corrente di 7 millilitri per chilogrammo e a una velocità di ventilazione di 140 colpi al minuto.

Muovi il mouse sotto uno stereomicroscopio per microchirurgia. Tenendo la pelle al centro della gola, praticare un'incisione di 0,5 centimetri lungo la linea caudale/cefalica e separare i lobi della ghiandola salivare. Usa una pinza curva per separare delicatamente la fascia del muscolo sternoioideo fino a quando la laringe e la trachea sono visibili. Quindi, fissare i bordi dell'apertura con i divaricatori attaccati agli elastici.

Quindi, tirare delicatamente la lingua lateralmente e utilizzare una pinza per inserire l'ago interno smussato di una cannula calibro 16 nella trachea. Visualizzare un corretto inserimento nella trachea attraverso l'incisione della gola e collegare la cannula al ventilatore. Posizionare una soluzione fisiologica sterile allo 0,9% integrata con una garza imbevuta di iodopovidone sull'incisione per mantenere i tessuti bagnati durante l'operazione.

Quindi, immergere il tubo di scarico nell'acqua. La presenza di bolle indica una buona intubazione. Per la legatura dell'arteria coronaria discendente anteriore sinistra o LAD, spostare con cautela il mouse nella posizione di decubito sul lato destro e fissare nuovamente l'arto anteriore sinistro nella nuova posizione.

Identificare la linea tra il piccolo pettorale sinistro e i muscoli maggiori e praticare un'incisione cutanea obliqua di 1 centimetro lungo la linea. Utilizzando micro-forbici da dissezione smussate, separare la fascia dei muscoli pettorali senza incidere i tessuti e utilizzare divaricatori attaccati agli elastici per mantenere la separazione.

Impostare il ventilatore con una pressione positiva di fine espirazione di 3 centimetri di acqua. Usa una pinza smussata per aprire la cavità toracica nel terzo spazio intercostale tra la terza e la quarta costola. Posiziona due divaricatori nella gabbia toracica, uno su ciascuna costola, e usa una pinza fine curva per rimuovere con cura il pericardio senza danneggiare il cuore e i polmoni.

Individua il LAD come una linea superficiale rosso vivo che va dal bordo del padiglione auricolare sinistro verso l'apice. Utilizzare un porta-aghi per far passare una sutura di seta 7-0 sotto il LAD, da 2 a 3 millimetri sotto gli atri sinistri. Tirando lentamente la seta per evitare di strappare il tessuto cardiaco, legare la legatura con tre nodi. La parte inferiore sinistra del ventricolo sinistro impallidisce istantaneamente al momento della legatura.

Ora, rilascia i divaricatori costali e, tenendo la terza costola con una pinza, fai due passaggi con la sutura di seta 6-0 sotto la terza e la quarta costola. Mettere tre gocce di soluzione salina a 37 gradi Celsius, 0,9% sull'apertura e chiudere il tubo di scarico dell'espirazione per 2 o 3 cicli respiratori per gonfiare correttamente i polmoni.

Stringere e fissare la sutura con due lanci e rilasciare i divaricatori che trattengono i muscoli, aiutando i muscoli a tornare nella loro corretta posizione anatomica. Quindi, chiudere la pelle toracica con due punti e due lanci di seta da sutura 5-0. Chiudere la pelle della gola con un punto, una seta di sutura 5-0 e due lanci.