0 visualizzazioni • 3:44 min. • July 8th, 2025
Per iniziare, posizionare un topo anestetizzato in posizione supina su una tavola di dissezione. Praticare un'incisione per accedere alla cavità toracica ed esporre il cuore. Individua l'aorta e i suoi rami: l'arteria carotide comune sinistra e l'arteria brachiocefalica. Sezionare queste arterie per isolare il cuore.
Immediatamente, immergere il cuore asportato in una capsula di Petri contenente una soluzione tampone ossigenata ricca di sostanze nutritive. In concomitanza, inserire una cannula nel cuore in modo tale che la sua punta raggiunga l'aorta ascendente. Utilizzare una sutura per legare la cannula. Collegare la cannula a una siringa contenente una soluzione di perfusione ossigenata.
Iniettare la soluzione di perfusione nel cuore. Questo passaggio consente al sangue di uscire dalle arterie coronarie e di fuoriuscire dalle vene polmonari. Quindi, collegare il cuore cannulato all'apparato di Langendorff. Utilizzare la pompa peristaltica per eseguire la perfusione a portata costante.
In queste condizioni, il tampone si perfonde nel cuore. Questo crea una pressione di incannulamento che chiude le valvole aortiche, provocando il movimento del tampone attraverso le arterie coronarie. Alla fine, il tampone perfonde i muscoli cardiaci in modo retrogrado e successivamente si diffonde attraverso le vene polmonari. Un cuore perfuso con successo è ora pronto per ulteriori applicazioni a valle.
Dopo l'eutanasia di un topo maschio C57BL/6 di 8-10 settimane, utilizzare una pinza per tessuti per sollevare la pelle dello xifoide. Quindi, usando le forbici per tessuti, praticare una piccola incisione laterale attraverso la pelle. Eseguire una dissezione smussata tra la pelle e la fascia. Estendere l'incisione cutanea verso le ascelle a forma di V su entrambi i lati e continuare l'incisione attraverso la gabbia toracica.
Quindi, usando una pinza per tessuti, bloccare lo sterno e deviare la gabbia toracica verso l'alto per esporre completamente il cuore e i polmoni. Usando una pinza curva, staccare il pericardio. Se la ghiandola del timo copre i grandi vasi, usa due pinze curve per strappare la ghiandola del timo verso entrambi i lati. Quindi, tirare delicatamente la base del cuore verso la coda fino a quando l'aorta e le sue arterie di branca sono visibili come un vaso sanguigno a forma di Y.
Sezionare l'aorta all'arteria carotide comune sinistra. Quindi, tagliare l'arteria brachiocefalica. Asportare il cuore e immergerlo immediatamente in una capsula di Petri contenente la soluzione di Tyrode per lavare e pompare il sangue residuo. Quindi, trasferire il cuore in un'altra capsula di Petri contenente la soluzione 1.
Sotto uno stereomicroscopio, usando le forbici dell'iride fine, taglia il tessuto in eccesso. Espellere le bolle d'aria dalla siringa. Quindi, con l'assistenza di due pinze di legatura diritte, eseguire l'incannulamento aortico retrogrado, facendo attenzione che l'intero processo di incannulamento venga eseguito sotto la superficie del liquido. Regolare la profondità di incannulamento in modo che la punta della cannula si trovi nell'aorta ascendente, facendo attenzione a non penetrare nelle valvole aortiche.
Quindi, con una sutura pre-nodo 3-0, legare l'aorta alla tacca della cannula. Iniettare delicatamente la soluzione 1 dalla siringa per eliminare il sangue residuo. Quindi, collegare il cuore cannulato all'apparato di Langendorff, facendo attenzione a non introdurre bolle d'aria nel cuore. Dopo aver collegato il cuore cannulato all'apparato di Langendorff, perfondere il cuore con la soluzione 1 per circa 2 minuti.