JoVE Encyclopedia of Experiments
Biologia
0 visualizzazioni • 2:52 min • July 8th, 2025
Gli embrioni di topo sono utilizzati come sistemi modello per lo studio dell'embriogenesi precoce dei mammiferi. Per recuperare gli embrioni di topo perinatale allo stadio desiderato dello sviluppo embrionale, iniziare con un topo gravido soppresso in posizione supina.
Successivamente, sterilizzare la sua zona addominale e praticare un'incisione trasversale sulla parete addominale per rivelare le corna uterine sottostanti. Le corna uterine sono lunghe strutture tubolari contenenti una serie di embrioni. Ora, separa accuratamente le corna uterine dall'addome asportandole dal tessuto circostante.
Trasferisci le corna uterine raccolte in un piatto contenente tampone. Sciacquare le corna uterine per rimuovere i detriti di tessuto e il sangue. Inoltre, incidere tra i siti di impianto lungo le corna uterine per separare ogni embrione. Asportare la decidua, lo strato placentare materno, insieme al disco placentare derivato dall'embrione.
Successivamente, rimuovere la piccola struttura membranosa extraembrionale che circonda l'embrione e che gli fornisce nutrimento: il sacco vitellino. Infine, rimuovere la membrana amniotica - la membrana extraembrionale più interna costituita da una sacca piena di liquido che circonda e protegge l'embrione - per rilasciare l'embrione di topo.
Gli embrioni perinatali recuperati possono essere utilizzati per studiare lo sviluppo precoce dei mammiferi.
Pulire le forbici da dissezione e le pinze con etanolo al 70%. Per raccogliere embrioni perinatali a E18.5 o E19.5, in primo luogo, sopprimere i topi gravidi utilizzando l'inalazione di anidride carbonica. Quindi, eseguire la lussazione cervicale secondo le linee guida NIH.
Successivamente, spruzzare etanolo al 70% sulla superficie addominale ventrale dell'animale. Quindi, usando le forbici da dissezione sterili e le pinze, aprire la cavità addominale. Solleva l'intero utero e separalo dal corpo sulla punta delle corna uterine. Quindi, sciacquare l'intero utero con 1x PBS in una capsula di Petri.
Tagliare l'utero segmentalmente con le forbici da dissezione e rimuovere la decidua placentare con una pinza da dissezione per esporre gli embrioni nei sacchi vitellino. Rimuovere prima il sacco vitellino e poi rimuovere la membrana amniotica con una pinza da dissezione per liberare gli embrioni perinatali.