Isolamento delle ovaie di topo neonatale: una procedura chirurgica per prelevare un paio di ovaie da un modello di topo neonatale

Per isolare le ovaie di topo neonatale, iniziare con un cucciolo di topo neonatale soppresso in posizione supina su una piattaforma chirurgica. Praticare una lunga incisione chirurgica sulla pelle e sulla parete del corpo per esporre la cavità addominale. Successivamente, sposta delicatamente l'intestino per rivelare le corna uterine sottostanti.

Le corna uterine sono due lunghe strutture tubolari che convergono alla cervice e si estendono dalla vescica verso i reni. Identificare le ovaie - piccole ghiandole di forma ovale - situate appena sotto i reni sulla punta delle corna uterine, collegate tramite gli ovidotti.

Ora, taglia il sito di attacco dell'ovaio da ciascun corno uterino per rilasciare le ovaie. Trasferire immediatamente le ovaie asportate in una piastra di coltura sterile contenente un terreno preriscaldato adatto per mantenere la vitalità degli ovociti all'interno del tessuto. Posizionare il piatto di coltura sul tavolino riscaldato di un microscopio da dissezione.

Usando un ago, rimuovere con cura la borsa ovarica, una sacca di tessuto connettivo che circonda l'ovaio e tutti i resti dell'ovidotto. Infine, trasferire le ovaie in una piastra a più pozzetti contenente il terreno. Le ovaie isolate possono essere utilizzate per l'elaborazione a valle.

Iniziare trasferendo 1 millilitro di terreno di dissezione in ciascuna capsula di vetro sterile per embrioni. Dopo aver eliminato i cuccioli di età da 0 a 5 giorni dopo la nascita, afferrare la pelle che copre la parete addominale con una pinza sottile e incidere la pelle e la parete del corpo. Apri questa grande incisione, esponendo l'addome. La vescica è solitamente gonfia in questa fase e può essere perforata per facilitare la dissezione.

Usando una pinza da orologiaio, sposta le budella. Quindi, su entrambi i lati, segui le corna uterine dalla vescica fino al rene. L'ovaio è una struttura simile a una nuvola situata appena sotto il rene nella parte superiore dell'utero. Afferrare delicatamente l'ovaio e, con le forbici, tagliarla dall'utero. Dopo aver sezionato entrambe le ovaie, trasferirle in piatti riempiti con terreno di dissezione caldo.

Utilizzare un microscopio da dissezione con un tavolino riscaldato a 37 gradi Celsius per sezionare le ovaie. Usando aghi da insulina, taglia via la sacca della borsa e il materiale in eccesso, inclusa la tuba di Falloppio, fino a quando non rimane solo l'ovaio. Quindi, trasferire ciascuna ovaia nel pozzetto di una piastra preparata utilizzando una pipetta curva.