Colata di resina del sistema biliare: una tecnica per analizzare l'architettura 3D del sistema biliare in un modello murino utilizzando l'iniezione di resina radiopaca

Il sistema biliare è costituito dal fegato, dalla cistifellea e da una rete di dotti che si uniscono per formare il dotto biliare comune o CBD, che trasporta la bile all'intestino.

Per la colata di resina del sistema biliare, prendere un topo che è stato perfuso per rimuovere il sangue dal fegato e dalla cistifellea.

Posiziona il mouse in posizione supina.

Visualizza la cavità addominale con un microscopio da dissezione per localizzare la superficie viscerale del fegato per identificare lo sfintere di Oddi, uno strato muscolare presente all'estremità distale del CBD prima che entri nell'intestino.

Fai un'incisione obliqua nel CBD accanto allo sfintere di Oddi.

Inserisci il tubo nel CBD. Collegare l'altra estremità del tubo a una siringa contenente una sospensione di resina colorata e radiopaca.

Iniettare la sospensione di resina nel condotto.

La resina si sposta dal CBD nella rete di dotti biliari più piccoli, diffondendosi infine all'interno del fegato e della cistifellea. La stesura può essere tracciata visualizzando il movimento della resina colorata attraverso i terminali di piccoli condotti.

Rimuovere il tubo e lasciare che la resina polimerizzi.

Ottenere le immagini micro-CT dei condotti. La resina, essendo radiopaca, non consente il passaggio dei raggi X, fornendo un contrasto con il sistema biliare e aiutando nell'analisi della sua architettura 3D.

Prima di iniettare la resina nel sistema biliare del topo, iniziare a muovere l'intestino e il pancreas sul lato sinistro del topo utilizzando un batuffolo di cotone, inumidito con PBS, per esporre il dotto biliare comune e la vena porta. Quindi, praticare una piccola incisione trasversale nella vena cava inferiore. Capovolgere il lato ventrale del fegato verso il cuore per esporre la superficie viscerale e la regione ilare e individuare il dotto biliare comune che va dalla regione ilare attraverso il pancreas e nell'intestino allo sfintere di Oddi. Utilizzare la pinza dritta per liberare l'area del tessuto circostante di circa 5 millimetri dal dotto biliare comune.

Quindi, posizionando un filo di sutura di seta sotto il dotto biliare comune, legare un nodo allentato attorno al dotto biliare comune. Tenere le forbici a molla piatte contro il dotto biliare comune per praticare un'incisione obliqua al dotto biliare comune nel punto in cui il dotto biliare comune entra nel pancreas e nell'intestino, accanto allo sfintere di Oddi. Quindi, mescola 1 millilitro di resina gialla con 50 microlitri di agente indurente MV e riempi una siringa Luer da 1 millilitro con la miscela di agente indurente resina.

Collegare la siringa piena con il set di tubi #1 e premere lo stantuffo per riempire il tubo fino a quando la miscela di resina e agente indurente gocciola dalla punta del tubo. Utilizzare la pinza per raddrizzare l'area intorno all'incisione del dotto biliare comune, prima di inserire il tubo nell'apertura del dotto biliare comune, con il bordo più lungo della punta smussata verso il basso verso il lato dorsale del dotto biliare. Quindi, stringere il nodo del filo di seta per fissare il tubo all'interno del dotto biliare comune.

Dopo aver iniettato la resina nel dotto biliare comune, osservare la cistifellea e i singoli lobi del fegato. Massaggia il fegato con un batuffolo di cotone inumidito con PBS per aiutare a distribuire equamente la resina. I rami terminali dei dotti biliari riempiti di resina saranno debolmente visibili sulla superficie del fegato. Interrompere l'iniezione della resina quando compaiono punti di resina sulla superficie del fegato o quando si incontra resistenza. Quindi, rimuovere il tubo estraendo il dotto biliare comune e stringere rapidamente il nodo di seta usando una pinza per evitare che la resina fuoriesca.