Modellazione dell'ictus fototrombotico in un modello murino: una tecnica di illuminazione laser attraverso il cranio del topo dopo la somministrazione di colorante fotosensibile per indurre la fototrombosi

Per iniziare, stabilizzare un topo anestetizzato in un'unità stereotassica. Collegare una sonda per monitorare la temperatura del mouse. Regola la sua temperatura corporea utilizzando un termoforo.

Successivamente, sterilizzare il sito chirurgico e praticare un'incisione longitudinale per esporre il cranio.

Raschiare via il periostio sottostante, uno strato di tessuto connettivo dalla superficie del cranio.

Identificare la sutura coronale e segnare la posizione di interesse dalla bregma, il punto di intersezione delle suture coronali e sagittali.

Fissare un nastro con una piccola apertura sulla regione contrassegnata per limitare l'area esposta durante l'illuminazione laser. Ora, inietta il colorante fotosensibile desiderato nella cavità peritoneale del topo.

Le molecole di colorante iniettate viaggiano attraverso il sistema circolatorio e raggiungono il cervello.

Quindi, posizionare la sorgente laser appropriata sopra la regione contrassegnata e illuminare l'area per la durata desiderata. Dopo l'illuminazione, il colorante circolante viene attivato e produce specie di ossigeno altamente reattive. Questi agiscono danneggiando le membrane delle cellule endoteliali nei vasi sanguigni nell'area illuminata.

Il danno alle cellule endoteliali promuove l'attivazione locale e l'aggregazione delle piastrine e la successiva formazione di trombi, interrompendo il flusso sanguigno cerebrale locale. Successivamente, reidratare il cranio usando soluzione salina. Chiudere l'incisione chirurgica e rimettere il topo nella sua gabbia.

L'interruzione del flusso sanguigno cerebrale danneggia il tessuto cerebrale, portando a disfunzioni del cervello nel topo.

Misurare il peso corporeo del topo per regolare la dose di Rose Bengal da iniettare. Impostare il termoforo controllato dal feedback associato per mantenere la temperatura corporea del mouse. Una volta che il topo è completamente anestetizzato e fissato nel telaio stereotassico, inserire delicatamente la sonda rettale per monitorare la temperatura corporea del topo durante la procedura chirurgica. Applicare l'unguento oculare al dexpantenolo su entrambi gli occhi e pulire la pelle e il pelo circostante con un agente disinfettante.

Usa le forbici per praticare una singola incisione longitudinale da 2,0 a 2,5 centimetri e ritrai per esporre il cranio. Usa del cotone per rimuovere delicatamente il periostio e individuare le suture coronali. Indossare occhiali protettivi durante l'accensione del laser a 561 nanometri e contrassegnare il bregma +3 millimetri a sinistra. Quindi, spegni il laser e aggancia l'adesivo con un foro di 4 millimetri di diametro nelle coordinate contrassegnate.

Iniettare il topo per via intraperitoneale con Rose Bengal. Posizionare il raggio laser a una distanza di 4-5 centimetri dal cranio. Accendi il laser e illumina il teschio per 20 minuti. Reidratare il cranio applicando due gocce di soluzione salina allo 0,9%. Dopo aver suturato la ferita, posizionare il topo in una camera di recupero a 37 gradi Celsius per riprendersi dall'anestesia. Dopo un'ora, rimetti il mouse nella gabbia in una stanza a temperatura controllata.