Isolamento del nodo senoatriale dal modello murino: una procedura per prelevare il nodo SA dal cuore murino

Nel cuore, il nodo senoatriale o il nodo S-A contiene cellule muscolari specializzate che avviano e propagano continuamente impulsi elettrici in tutto il cuore, impostando la frequenza del battito cardiaco.

Per isolare il nodo S-A, per prima cosa, preparare un topo eutanasia trattato con anticoagulante in posizione supina. Il trattamento anticoagulante aiuta a prevenire la formazione di coaguli di sangue per un efficiente isolamento dei tessuti.

Successivamente, praticare un'incisione cutanea trasversale seguita dal taglio delle pareti laterali della gabbia toracica per accedere al contenuto della cavità toracica ed esporre il cuore sottostante.

Idratare il cuore con un tampone contenente anticoagulante. Rimuovere i polmoni insieme alla trachea.

Recidere i principali vasi sanguigni per asportare il cuore dalla cavità toracica. Trasferire il cuore asportato in un piatto rivestito di silicone contenente tampone per maneggiare il delicato organo.

Fissare l'apice del cuore. Ora, individua la posizione della vena cava inferiore e superiore all'interno dell'atrio destro. Inoltre, identificare la posizione del nodo S-A all'interno della macchia di tessuto tra le vene cave.

Rimuovere l'apice per drenare il sangue dal cuore. Ora, separa gli atri dai ventricoli. Tagliare lungo il setto interatriale per rimuovere l'atrio sinistro. Stendere l'atrio destro in piano e asportare il tessuto del nodo S-A da esso.

Inizia tenendo la pelle del topo soppresso con un emostatico e usa le forbici chirurgiche per praticare un'incisione trasversale nella pelle, appena sotto il fondo della gabbia toracica dall'arco costale sinistro all'arco costale destro. Usa le forbici chirurgiche per aprire il peritoneo e separa con cura il fegato dal diaframma, senza intaccare il fegato, per prevenire un sanguinamento eccessivo.

Incidere il diaframma lungo il torace per esporre la cavità toracica. Usa le forbici chirurgiche per tagliare le pareti laterali della gabbia toracica, dai bordi degli archi costali fino alle clavicole, per esporre il cuore. Quindi, usa un ago da siringa calibro 23 per fissare la gabbia toracica sopra la spalla.

Utilizzare una pipetta di trasferimento per far cadere la soluzione eparinizzata calda di Complete Tyrode sul cuore per mantenerlo umido. Tenere i polmoni con una pinza Graefe extra fine e recidere la trachea con le forbici chirurgiche per rimuovere i polmoni. Per rimuovere il cuore, tenere l'apice del cuore con una pinza Graefe extra fine e tagliare l'aorta e la vena cava inferiore con le forbici chirurgiche.

Trasferire il cuore in una capsula di Petri contenente un elastomero siliconico polimerizzato e utilizzare una pipetta di trasferimento per bagnare il cuore con 2 o 3 millilitri di soluzione eparinizzata calda di Complete Tyrode. Attacca l'apice del cuore al piatto con un perno di dissezione.

Tenere la vena cava inferiore con il forcipe per laminectomia Dumont #2. Inserire un ago siringa calibro 22 attraverso la vena cava inferiore e superiore per individuare la loro posizione nell'atrio destro, che identifica anche la posizione approssimativa del nodo seno-atriale.

Tenere l'appendice atriale destra con la pinza per laminectomia Dumont #2 e inserire un perno di dissezione attraverso l'appendice atriale destra per tenerla in posizione. Ripetere la stessa procedura per l'appendice atriale sinistra. Quindi, rimuovere l'ago della siringa che copre la vena cava.

Usa le forbici Castroviejo per rimuovere l'apice del cuore praticando un'incisione trasversale attraverso i ventricoli o rilasciando il sangue dal cuore. Quindi, lavare il cuore aggiungendo la soluzione completa eparinizzata calda di Tyrode. Usa le forbici Castroviejo per tagliare lungo il setto atrioventricolare fino a quando gli atri non sono separati dai ventricoli e mantieni l'incisione più vicina al ventricolo.

Tagliare lungo il setto interatriale per rimuovere l'atrio sinistro. Posizionare i perni di dissezione nella periferia dell'atrio destro per renderlo piatto. Rimuovere il grasso, i vasi o i tessuti rimanenti dall'atrio utilizzando le forbici Castroviejo e individuare il nodo senoatriale nell'atrio destro.