Prelievo di ovaie intatte dal topo: una procedura chirurgica per isolare l'ovaio completo dal modello murino

Inizia con un topo femmina anestetizzato in posizione laterale destra su una piattaforma chirurgica. Quindi, radere l'addome del topo e sterilizzare l'area. Praticare un'incisione cutanea paralombare e sezionare i muscoli addominali per esporre la cavità addominale.

Ora, individua uno dei cuscinetti adiposi ovarici, il tessuto adiposo che circonda le ovaie. Gli ovidotti collegano le ovaie a lunghe strutture tubolari chiamate corna uterine. Inoltre, esteriorizza delicatamente l'ovaio insieme al cuscinetto adiposo ovarico, posizionandolo su una garza bagnata per mantenere il tessuto idratato.

Ora, identifica la borsa ovarica, la sottile membrana che incapsula l'ovaio e l'estremità dell'ovidotto. Incidere la borsa opposta all'ilo ovarico, che forma il confine tra ovaio e legamento ovarico. Il legamento ovarico collega strutturalmente l'ovaio al corno uterino.

Dopo aver esposto l'ovaio, rimuoverlo delicatamente dalla borsa ovarica e bloccare l'ilo ovarico per asportare l'ovaio. Trasferire l'ovaio asportato in una piastra di coltura contenente soluzione fisiologica refrigerata.

Conservare l'ovaio di topo intatto composto da unità funzionali - i follicoli ovarici, ciascuno contenente un ovocita, fino a nuovo utilizzo.

Prima di iniziare la procedura, confermare il livello appropriato di sedazione pizzicando le dita dei piedi e applicare un unguento sugli occhi dell'animale. Posiziona il mouse in posizione supina su una pila di tovaglioli di carta riscaldati e, iniziando appena sotto le costole e muovendoti distalmente, usa il tagliacapelli a lama numero 40 per rimuovere un quadrato di peli da 2 a 3 centimetri a pochi millimetri lateralmente alla linea mediana su ciascun lato dell'animale, con una striscia di peli da 1 a 2 2 centimetri che copre la linea mediana.

Dopo aver somministrato l'analgesia, trasferire l'animale su un campo chirurgico sterile riscaldato in posizione supina e utilizzare un pezzo di garza imbevuta di etanolo al 70% di 2 x 2 centimetri seguito da uno scrub betadine per disinfettare l'area chirurgica. Successivamente, praticare un'incisione paralombare da 1 a 1,5 centimetri in una delle aree chirurgiche e due forbici per sezionare la pelle dalla fascia sottostante.

Quindi, praticare un'altra incisione attraverso la fascia e sezionare lateralmente sotto la fascia il più superficialmente possibile fino a raggiungere la cavità addominale. Posizionare un telo chirurgico di garza di 2 x 2 centimetri sull'incisione e bagnare la garza con soluzione fisiologica sterile.

Usando una piccola pinza, individua il tessuto adiposo che circonda l'ovaio ed estrai delicatamente il cuscinetto adiposo e l'ovaio sul telo. Il cuscinetto adiposo ovarico apparirà più bianco del tessuto adiposo circostante. Posiziona un morsetto Bulldog da 1,5 pollici sul cuscinetto adiposo, facendo attenzione a non ostruire la borsa ovarica, per tenere il tratto in posizione durante la procedura.

Utilizzare un microscopio da dissezione per identificare la borsa ovarica. Quindi, afferrare la borsa con due pinze da orologiaio e incidere la borsa sul lato opposto rispetto all'ilo ovarico per esporre l'ovaio.

Prima di decidere dove aprire la borsa, prova a visualizzare una tasca nella borsa dove posizionerai la nuova ovaia prima della sutura. Aprire la borsa solo nella misura necessaria per rimuovere l'ovaio endogeno.

Rimuovere delicatamente l'ovaio dalla borsa e bloccare l'ilo ovarico con una pinza da orologiaio per asportare l'ovaio e prevenire il sanguinamento. Quindi, posizionare l'ovaio donatore in un vetro dell'orologio contenente soluzione salina sterile a 4 gradi Celsius e posizionare un coperchio sciolto sul vetro.