Installazione dell'assemblaggio dell'anello cranico nel modello murino: una procedura chirurgica per l'assemblaggio della finestra di visualizzazione dell'impianto sul cranio murino per l'imaging del midollo osseo del cranio ad alta risoluzione

Per l'impianto dell'anello cranico sul cranio del topo, in primo luogo, preparare un topo anestetizzato in posizione prona. Successivamente, fai un'incisione verticale sulla linea mediana per esporre il calvario, la parte superiore del cranio che protegge la cavità cranica che racchiude il cervello.

Ora, rimuovi con cura il periostio sottostante – un denso strato di tessuto connettivo vascolare – e tutti i detriti tissutali per un imaging ottimale. Pulisci la superficie esposta del cranio con soluzione fisiologica.

Quindi, applica la colla cianoacrilica sull'anello del teschio in metallo. Montalo sull'area desiderata del cranio asciutto ed esposto.

Tieni l'anello in posizione per consentirgli di attaccarsi saldamente al teschio. Mantenere la superficie del cranio idratata con soluzione fisiologica. Fissare l'anello all'area del cranio con cemento dentale per evitare perdite durante l'imaging successivo.

Riempire l'anello con soluzione fisiologica, che funge da mezzo di immersione per la microscopia ad alta risoluzione.

Trasferisci il mouse con l'anello del teschio su una piastra di supporto fissata al supporto del blocco. La testa del topo è sollevata per evitare il distacco dell'anello dal cranio.

Fissare l'anello sul supporto del blocco per immobilizzare la testa del mouse e prevenire artefatti di movimento indotti dalle vie respiratorie durante l'imaging. Posiziona il supporto e il gruppo del topo per l'imaging intravitale attraverso l'osso del cranio, facilitando la visualizzazione delle cellule specializzate e del loro ambiente nativo in tempo reale nel midollo osseo sottostante.

Disinfettare il cuoio capelluto con etanolo al 70% con un tovagliolo di carta mentre si rimuovono i capelli sciolti. Usa forbici e pinzette sottili sterili per praticare un'incisione a forma di T sulla linea mediana fino a 1 centimetro tra le orecchie sul cuoio capelluto per esporre il calvario.

Esponi il teschio con una pinzetta. Quindi, usa forbici e pinzette per rimuovere con cura il periostio. Utilizzare un batuffolo di cotone sterile imbevuto di soluzione fisiologica per rimuovere tutto il periostio ed eventuali detriti o peli che potrebbero alterare l'imaging. Sciacquare il cranio con soluzione fisiologica per rimuovere eventuali tracce di sangue e asciugare rapidamente l'osso con un batuffolo di cotone.

Applicare il gel di colla sull'anello. Posiziona l'anello sull'osso esposto e mantienilo per alcuni secondi per consentire all'anello di attaccarsi saldamente al cranio. Inumidire leggermente il cranio con un batuffolo di cotone inumidito con soluzione salina.

Preparare la pasta dentale siliconica mescolando accuratamente i componenti blu e giallo in un rapporto 1 a 1. Sigillare l'anello applicando la pasta dentale per evitare perdite durante l'imaging. Rimuovere con cautela la pasta dentale o la colla che potrebbe essere entrata nell'anello. Quindi riempire l'anello con soluzione fisiologica per verificare la perdita.

Posiziona il mouse sul supporto e metti un impacco piegato sotto la testa dell'animale per sollevare la testa e prevenire il distacco dell'anello dal teschio quando attaccato al supporto. Avvitare l'anello sul supporto del blocco. Posizionare il supporto e il gruppo mouse nella camera riscaldata del microscopio.