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Gli ultrasuoni ad altissima frequenza, o UHFUS, facilitano l'imaging ad alta risoluzione spaziale di strutture superficiali in un animale vivo.
Per iniziare, posizionare un topo anestetizzato in posizione supina sulla piattaforma riscaldata di una stazione di imaging per regolare la sua temperatura corporea. Inserire una sonda per monitorare la temperatura corporea.
Successivamente, rivestire gli arti con pasta conduttiva e fissarli agli elettrodi dell'elettrocardiogramma incorporati nella piattaforma per monitorare i parametri fisiologici. Rimuovere i peli dalla regione inguinale del topo. Applicare il mezzo di accoppiamento acustico per fornire un percorso efficiente per la propagazione degli ultrasuoni. Posizionare il trasduttore UHFUS sulla regione inguinale.
Durante la scansione, il trasduttore emette impulsi ultrasonici ad altissima frequenza con ridotta profondità di penetrazione nel linfonodo inguinale superficiale. In base alla densità e alle dimensioni dei linfonodi, una frazione degli impulsi ultrasonici con ampiezze variabili viene riflessa e ricevuta dal trasduttore, convertendo questi segnali in segnali elettrici.
Inoltre, il computer li ricostruisce per ottenere un'immagine ecografica bidimensionale ad alta risoluzione, in cui la luminosità di ciascun punto è determinata dall'ampiezza dei segnali riflessi. Scansiona l'intera regione del linfonodo con un movimento lineare del trasduttore per ottenere una sequenza di immagini ad asse corto.
Utilizzando un software adatto, post-elaborare le immagini ecografiche acquisite per creare un'immagine ecografica 3D del linfonodo inguinale e misurarne il volume.
Dopo aver confermato l'anestesia, trasferire l'animale su una tavola riscaldata della stazione di imaging a ultrasuoni ad altissima frequenza, mantenendo l'animale in posizione supina. Regolare la temperatura della scheda utilizzando una sonda rettale lubrificata con vaselina per mantenere la temperatura corporea del topo nell'intervallo fisiologico.
Rivestire le zampe anteriori e posteriori con pasta conduttiva e fissarle con nastro adesivo agli elettrodi della piastra ECG incorporati nella scheda. Verificare che i parametri fisiologici siano correttamente acquisiti e visualizzati.
Rimuovere i peli da entrambe le aree inguinali applicando un agente depilatorio e rivestirli con un mezzo di accoppiamento acustico. Quindi, fissare la sonda lineare a ultrasuoni ad altissima frequenza in un motore 3D specializzato incorporato nella stazione di imaging, consentendo il movimento automatizzato e graduale della sonda.
Orientare e regolare correttamente la posizione della sonda ecografica per ottenere immagini dell'asse corto del linfonodo inguinale e posizionare la regione di interesse nella zona focale.
Impostare la distanza di scansione tra due e cinque millimetri, la dimensione del passo a 44 micrometri, con un risultato da 46 a 114 passi di scansione per fetta di linfonodi e un tempo di acquisizione da 1 a 3 minuti per animale.
Scansiona l'intero volume del linfonodo inguinale come una sequenza di immagini 2D B-mode, acquisendo immagini a più livelli mediante movimento lineare del trasduttore con dimensioni dei passi su scala micrometrica, per generare dati 3D in termini di respirazione e cine cine gated cardiac-gated.
Dopo l'imaging, archiviare digitalmente le immagini acquisite in formato grezzo per ulteriori analisi offline.