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Biologia
0 visualizzazioni • 4:19 min • July 8th, 2025
Per iniziare, assicurati un topo soppresso in posizione supina. Incidere lateralmente attraverso la parete toracica per accedere alla cavità toracica ed esporre il cuore. Asportare l'atrio destro e iniettare soluzione salina nel ventricolo sinistro per drenare il sangue dal cuore.
Recidere le connessioni vascolari tagliando i principali vasi sanguigni. Inoltre, incidere l'arteria polmonare a una distanza adeguata dalla giunzione ventricolo-arteriosa, che funge da condotto per la pressurizzazione. Rimuovere i ventricoli per esporre il lato ventricolare alla pressione atmosferica.
A questo punto, fissare un tubo di pressurizzazione nell'arteria polmonare, garantendo uno spazio adeguato tra la giunzione ventricolo-arteriosa e l'estremità del tubo per consentire il movimento dei lembi valvolari durante la pressurizzazione.
Al tubo, collegare il serbatoio riempito di soluzione fisiologica fissato ad un'altezza calcolata rispetto alla valvola polmonare in base alla pressione idrostatica desiderata da applicare al lato arterioso della valvola. Il flusso unidirezionale dal lato arterioso con la pressione idrostatica applicata provoca la chiusura dei lembi valvolari e la distensione del tronco polmonare.
Successivamente, introdurre un opportuno fissativo nel serbatoio e continuare la perfusione. Il fissativo perfuso stabilizza la morfologia cellulare e l'architettura tissutale.
Posizionare una garza imbevuta di fissativo sul tessuto per fissare il tessuto che circonda la valvola e prevenire l'essiccazione. Conservare la valvola cardiaca fissa in fissativo fino all'uso.
Inizia con l'autoclave degli strumenti necessari per la dissezione del topo, tra cui forbici fini, micro pinze, pinze microvascolari, pinze per l'applicazione di pinze, portamicroaghi, forbici a molla e divaricatori.
Dopo l'eutanasia di un topo adulto C57 Black 6, posizionarlo in posizione di decubito dorsale su un vassoio, fissare gli arti con del nastro adesivo ed eseguire la toracotomia. Esporre il cuore rimuovendo il tessuto adiposo e la fascia in eccesso, quindi rimuovere l'atrio destro e perfondere il ventricolo sinistro con una soluzione salina a temperatura ambiente.
Rimuovere l'intero cuore recidendo la vena cava superiore, la vena cava inferiore, l'arteria polmonare e l'aorta e tagliare circa 2 millimetri sopra la giunzione ventricolo-arteriosa, che fungerà da condotto per la pressurizzazione.
Rimuovere i ventricoli sinistro e destro per esporre le camere alla pressione atmosferica, assicurandosi che la struttura del tronco polmonare non sia influenzata dalla rimozione dei ventricoli. Anastomizzare il tubo di pressurizzazione con l'arteria polmonare, lasciando una distanza di circa 1 millimetro tra la giunzione sino-tubulare e l'estremità del tubo, per accogliere ampi movimenti dei lembi e del tronco polmonare.
Elevare il serbatoio ad una pressione fisiologica analoga e riempirlo con la soluzione salina. Testare il sistema a flusso continuo per assicurarsi che non vi siano ostruzioni o bolle d'aria. Collegare un rubinetto alla valvola polmonare anastomizzata e garantire un flusso adeguato attraverso il tubo commutando il tratto di uscita. Una volta che il flusso è sufficiente, commutare il deflusso verso la valvola polmonare anastomizzata e garantire la pressurizzazione del tronco polmonare, identificato dalla distensione del tronco.
Dopo aver confermato la pressurizzazione del tronco polmonare, incorporare gradualmente la soluzione fissativa primaria, fino a quando non viene spurgato il 25% della capacità del serbatoio della soluzione salina. Posizionare una garza imbevuta di fissativo sul campione di tessuto per evitare che si secchi. Perfondere il fissativo per 3 ore, riempiendo nuovamente il serbatoio per mantenere una pressione costante.
Dopo la perfusione, conservare la valvola cardiaca nella soluzione fissativa a 4 gradi Celsius fino all'uso, per un massimo di 1 settimana.