Modello di ferita murina guidato da colonscopia: un metodo per isolare il letto della ferita indotta da biopsia dal colon per comprendere il processo di guarigione

0 visualizzazioni2:48 min • July 8th, 2025

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Le biopsie colonscopicamente guidate in modelli murini inducono siti di ferita nel colon. Questi letti di ferite sono isolati per studi molecolari e istologici per comprendere il processo di guarigione delle ferite nelle malattie infiammatorie del tratto gastrointestinale o gastrointestinale.

Per iniziare l'isolamento del letto della ferita, posizionare un topo sperimentale eutanasia con una ferita indotta da colonscopia in posizione supina. Incidere la pelle addominale e i muscoli sottostanti per esporre la cavità corporea.

Posiziona le forbici chiuse sotto il colon e sollevalo. Taglia il colon nel suo punto medio e nell'ano per separarlo dal corpo. Sciacquare il colon con un tampone appropriato per rimuovere il contenuto fecale.

Posizionare i due punti su carta da filtro e tagliarli longitudinalmente, con il lato mesenterico rivolto verso il basso sulla carta da filtro. Ora, aggiungi il colorante blu di metilene sul colon e osserva al microscopio.

Il colorante colora il tessuto morto e granulato nel letto della ferita, facendolo apparire più scuro del tessuto sano circostante, consentendone una facile identificazione. Preservare il letto della ferita isolato per gli studi di espressione genica.

Al punto finale sperimentale appropriato, aprire la pelle e gli strati muscolari addominali per esporre la cavità corporea dell'animale da esperimento e posizionare una pinza chiusa sotto il colon. Solleva delicatamente il colon per liberarlo dal mesentere sottostante e taglia il tessuto nel suo punto medio e nell'ano per raccoglierlo dal topo.

Utilizzare una siringa da 20 millilitri riempita di PBS ghiacciato e dotata di un ago per sonda per ratti, per eliminare il contenuto fecale e posizionare il colon pulito su un pezzo di carta da filtro. Aprire il colon longitudinalmente, facendo attenzione che il lato mesenterico sia rivolto verso il basso contro la carta da filtro, e utilizzare una pipetta Pasteur per coprire la mucosa con blu di metilene allo 0,2%.

Dopo alcuni secondi, drenare la macchia in eccesso e osservare il colon al microscopio da dissezione per individuare il letto della ferita. Usa le micro forbici dell'iride da 4 pollici per tagliare intorno al bordo del letto, facendo attenzione a non tagliare lo strato muscolare, e usa una pinzetta a punta fine per trasferire il tessuto sezionato in un tubo per il congelamento e/o la conservazione.

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Ultimo aggiornamento: 15 agosto 2026