0 visualizzazioni • 3:53 min. • July 8th, 2025
Inizia con un topo soppresso in posizione supina. Sterilizzare l'arto posteriore. Rimuovere chirurgicamente la pelle e la fascia, un sottile involucro di tessuto connettivo sotto la pelle, per esporre i muscoli degli arti posteriori sottostanti.
Localizzare il muscolo tibiale anteriore o TA sul lato laterale della tibia. Tenendo il tendine distale TA, staccare il muscolo dal tessuto sottostante. Tagliare il muscolo vicino al ginocchio per asportare il muscolo TA, rivelando l'estensore lungo delle dita sottostante o il muscolo EDL situato nel compartimento anteriore dell'arto posteriore.
Incidere il tendine EDL distale e tirare il muscolo EDL verso il ginocchio. Tagliare il tendine EDL prossimale per asportare il muscolo EDL. Trasferire il muscolo raccolto in una provetta con terreno preriscaldato contenente enzimi collagenasi e incubare per la durata appropriata. Le collagenasi rompono il tessuto connettivo che circonda ciascuna fibra muscolare o miofibra all'interno del muscolo. Questa fase di digestione scioglie le miofibre dallo strato interno del muscolo.
Dopo l'incubazione, trasferire con cura il muscolo digerito in una piastra multipozzetto contenente terreni preriscaldati per aumentare il tasso di sopravvivenza delle miofibre. Trasferire la piastra sul tavolino riscaldato di uno stereomicroscopio. Ora, triturare delicatamente il muscolo digerito per dissociare e rilasciare le singole miofibre nella soluzione.
Le miofibre EDL isolate possono essere utilizzate per ulteriori analisi a valle.
Spruzzare tutte le attrezzature e gli arti posteriori del topo con etanolo al 70%. Usa forbici indurite e curve fini e pinze fini per rimuovere la pelle ed esporre i muscoli sottostanti. Rimuovere la fascia circostante con la pinza a forma di pinze finemente curve senza danneggiare i muscoli sottostanti.
Per rimuovere il tibiale anteriore o TA, afferrare il tendine TA distale con una pinza e tagliarlo con le forbici sottili. Tenendo il TA al tendine, tiralo verso il ginocchio e taglia il muscolo vicino al ginocchio per esporre il muscolo EDL.
Sollevare il tendine EDL distale con una pinza curva e tagliare con le forbici a molla Vannas fine. Esporre il tendine EDL prossimale tirando con cautela l'EDL verso il ginocchio. Quindi, taglia il tendine prossimale con le forbici. Incubare i muscoli EDL nel tubo di reazione a 37 gradi Celsius in un bagno di acqua circolante. Arresta la digestione quando i muscoli si allentano e sono visibili singole miofibre.
Lavorando sotto un microscopio stereobinoculare, dotato di una piastra riscaldante, lavare i muscoli con un mezzo isolante caldo, utilizzando la pipetta di grande diametro. Dissociare i muscoli con la pipetta a foro largo, fino a quando il numero desiderato di miofibre galleggia liberamente nella soluzione.