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Biologia
0 visualizzazioni • 2:57 min • July 8th, 2025
L'occhio suino contiene una popolazione di cellule epiteliali cuboidali che contengono numerosi melanosomi - organelli che aiutano nell'assorbimento della luce - con conseguente aspetto pigmentato di queste cellule. A seconda della posizione di queste cellule, le cellule epiteliali presenti sotto la retina sono chiamate cellule epiteliali pigmentate retiniche, o cellule RPE, e quelle che rivestono l'iride sono note come cellule epiteliali pigmentate dell'iride o cellule IPE.
Per isolare le cellule RPE e IPE, iniziare prendendo un occhio suino. Immergere l'occhio in una soluzione disinfettante adatta per rimuovere eventuali microbi attaccati alla superficie dell'occhio.
Rimuovere l'occhio dalla soluzione disinfettante e utilizzare un ago per praticare una piccola incisione vicino all'iride. Utilizzare questa apertura per eseguire un taglio circonferenziale completo lungo il bordo dell'iride. Questo stacca il segmento anteriore dell'occhio contenente l'iride dal bulbo oculare posteriore, che ha la retina. Rimuovere la porzione in eccesso e trasferire l'iride e il bulbo oculare in piastre di coltura separate.
Aggiungere un terreno di coltura adatto nella piastra contenente l'iride e nel bulbo oculare. Raschiare il fazzoletto. La forza meccanica allenta le cellule epiteliali, rilasciandole nel terreno. Aspirare le cellule IPE e RPE staccate. Seminali in piastre di coltura separate e incubali fino a nuovo utilizzo.
Pulisci il tessuto muscolare rimanente e la pelle dagli occhi, disinfetta gli occhi con una soluzione a base di iodio e risciacquali con PBS.
Per isolare le cellule IPE, rimuovere la lente ed estrarre l'iride, come dimostrato. Dopo aver preparato due iris, aggiungere 1 millilitro di terreno completo e isolare le cellule grattando con una pipetta Pasteur piatta lucidata a fuoco, quindi contare e seminare le cellule. Posizionare la piastra nell'incubatrice.
Per isolare le cellule RPE, rimuovere il vitreo e la retina dal segmento posteriore e posizionare il bulbo in una capsula di Petri. Riempire il bulbo con 1 millilitro di terreno completo. Utilizzando una pipetta Pasteur curva lucidata a fuoco, rimuovere le cellule RPE, raccogliere la sospensione cellulare all'interno del bulbo utilizzando una pipetta da 1.000 microlitri e trasferirla in una provetta da 1,5 millilitri per la risospensione. Quindi, contare, seminare le cellule e incubare la piastra come precedentemente dimostrato.