0 visualizzazioni • 3:02 min. • July 8th, 2025
L'ovocita suino è circondato da un gruppo compatto e multistrato di cellule cumuliformi che formano il complesso cumulo-ovocita o COC. Le cellule del cumulo più interne estendono i processi attraverso la zona pellucida dell'ovocita. Questi processi sviluppano sia gap che giunzioni intermedie, che aiutano nel trasferimento intercellulare di molecole tra l'ovocita e le cellule del cumulo circostanti. Queste interazioni bidirezionali mantengono la vitalità dei COC, che è un fattore determinante per il successo della fecondazione in vitro o IVF.
Per isolare i COC, immergere alcuni follicoli ovarici suini in una capsula di Petri contenente il terreno di maturazione. Questo terreno contiene gli ormoni necessari per la maturazione degli ovociti in vitro. Sezionare i follicoli ovarici per rilasciare i COC e il liquido follicolare nella capsula di Petri. Questo fluido integra i mezzi di maturazione con ulteriori nutrienti e ormoni essenziali per la competenza degli ovociti.
Aspirare il contenuto follicolare rilasciato e trasferirlo in un'altra piastra di Petri. Visualizzare la piastra al microscopio per identificare i COC non danneggiati che mostrano una morfologia normale costituita da ovociti rotondi con citoplasma moderatamente granulare e un corpo polare intatto circondato da cellule cumuliformi.
Isolare un singolo COC e trasferirlo nel pozzetto centrale contenente il terreno di maturazione di una piastra IVF. Conservare la piastra a una temperatura ottimale fino a nuovo utilizzo.
Per isolare i COC da follicoli di medie dimensioni, trasferire due o tre ovaie in una piastra di Petri sterile da 10 cm riempita con HM. Tagliare delicatamente la superficie dei follicoli ovarici sporgenti con una lama chirurgica sterile # 15, che causerà il fluido follicolare e la fuoriuscita dei COC nella piastra di Petri. Aspirare il contenuto follicolare con un ago calibro 28 collegato a una siringa monouso e trasferirlo in un'altra piastra di Petri.
Per preparare le piastre di Petri IVF, aggiungere 1 millilitro di HM ai pozzetti centrali e posizionare tre o quattro gocce di HM negli anelli esterni. Quindi, utilizzare una micropipetta in policarbonato per spostare i COC non danneggiati in gocce di HM negli anelli esterni e sciacquarli brevemente tre o quattro volte. Al termine, trasferitele singolarmente nella vasca centrale. Conservare le piastre per fecondazione in vitro nell'incubatrice.