0 visualizzazioni • 4:11 min. • July 8th, 2025
Lo strato più interno della cornea suina - la porzione anteriore dell'occhio avascolare trasparente - è costituito da cellule endoteliali corneali, o CEC, supportate dalla membrana basale - la membrana di Descemet, o DM. Le CEC mantengono la trasparenza corneale e una visione ottimale. Qualsiasi danno potrebbe influire sulla vista.
Per un danno selettivo CEC, iniziare con un occhio suino appena raccolto in un terreno adatto. Rimuovere i tessuti circostanti. Trattare l'occhio con un disinfettante appropriato per eliminare la contaminazione microbica superficiale. Dopo il lavaggio salino, esaminare otticamente l'occhio anteriore per escludere eventuali anomalie prima dell'irradiazione laser.
Fissare l'occhio in un apparecchio di supporto personalizzato davanti a un'unità con lampada a fessura dotata di un laser di una lunghezza d'onda specifica. Visualizzare i singoli strati corneali. Con l'energia laser e la posizione del punto di messa a fuoco appropriate, dirigere gli impulsi laser verso lo strato endoteliale corneale. Gli impulsi focalizzati di breve durata e ad alta potenza, provocano la rottura selettiva della CEC dalla superficie esposta evitando la diffusione del calore, proteggendo così il DM o il tessuto stromale.
Creando una porta di ingresso vicino al limbus - la giunzione corneosclerale, iniettare una soluzione viscoelastica nella camera anteriore contenente la cornea per stabilizzarla e proteggere le CEC rimanenti. Asportare e trasferire il segmento corneale trattato con laser in una piastra multipozzetto contenente terreno, con il lato CEC rivolto verso l'alto. Il modello di lesione dell'endotelio corneale ex vivo può essere utilizzato per ulteriori studi.
Dopo aver ottenuto gli occhi suini appena enucleati dal macello locale, posizionare i campioni a 4 gradi Celsius, terreno pieno. Usa le forbici per rimuovere i tessuti extracellulari e immergi gli occhi in una soluzione oftalmica di iodio povidone al 5% per cinque minuti. Quindi, posizionare i campioni disinfettati in PBS sterile a temperatura ambiente.
Utilizzando un dispositivo di tomografia a coerenza ottica del dominio spettrale, è possibile eseguire lo screening degli occhi per le principali patologie del segmento anteriore, come cicatrici corneali, edema e altre opacità. Dopo lo screening, posizionare gli occhi davanti a un'unità con lampada a fessura dotata di un laser Nd:YAG con una lunghezza d'onda di 1064 nanometri e un diametro della macchia focale di 10 micrometri in aria. Selezionare l'ingrandimento 12X e deviare l'illuminazione per visualizzare i singoli strati corneali.
Dopo aver impostato l'energia dell'impulso e il punto di messa a fuoco sui parametri appropriati per l'ablazione selettiva delle cellule endoteliali corneali, applicare diversi colpi laser al tessuto. Quindi, sotto un microscopio da dissezione, posizionare una paracentesi corneale chiara vicino al limbus e iniettare viscoelastico per stabilizzare la camera interna. Quindi, utilizzare una trefina da 8 millimetri per asportare la cornea centrale trattata con il laser e posizionare la cornea isolata in un pozzetto di una piastra a 12 pozzetti, con il lato endoteliale rivolto verso l'alto. Quando tutte le cornee sono state raccolte, aggiungere 3 millilitri di terreno pieno a ciascun campione e incubare i campioni per un massimo di tre giorni a 37 gradi Celsius.