Isolamento delle cellule endoteliali aortiche suine (pAEC): un metodo basato su enzimi per isolare le cellule endoteliali dall'aorta addominale suina raccolta

L'aorta - l'arteria principale che trasporta il sangue ossigenato dal cuore al corpo - è composta da tre strati o "tuniche": un'intima interna, una media media e un'avventizia esterna. Le cellule endoteliali o EC sono presenti nell'intima come un sottile monostrato continuo su una membrana basale di supporto costituita da proteine strutturali, principalmente collagene.

Per isolare le EC, iniziare con un'aorta suina raccolta in un piatto di coltura. Asportare le sue estremità e qualsiasi tessuto aderente circostante per prevenire la contaminazione delle cellule non endoteliali. Lavare l'aorta con un tampone contenente antibiotici per inibire la crescita microbica.

Far passare una sutura chirurgica sterile attraverso l'aorta e legare una delle sue estremità, mantenendo la sutura all'interno del lume. Fissare l'estremità legata e ritrarre la sutura per invertire completamente l'aorta. Ciò espone l'intima contenente EC alla digestione enzimatica. Trattare l'aorta con una soluzione di collagenasi preriscaldata e a bassa concentrazione per un'attività enzimatica ottimale e incubare.

La collagenasi scompone le proteine del collagene presenti nella membrana basale sottostante le CE, avvian