JoVE Encyclopedia of Experiments
Biologia
0 visualizzazioni • 2:31 min • July 8th, 2025
Lo scongelamento degli embrioni è un processo in cui gli embrioni congelati crioconservati vengono riscaldati e reidratati, ripristinando la loro attività biologica.
Per scongelare gli embrioni di coniglio crioconservati in una cannuccia criogenica sigillata, rimuovere la cannuccia dall'azoto liquido. Gli embrioni, con un volume minimo di terreni contenenti crioprotettori, sono fisicamente isolati da segmenti di aria e media all'interno della pailetta. Posizionare brevemente la cannuccia all'aria, facilitando il rilascio dei vapori di azoto liquido intrappolati, che altrimenti causano danni all'embrione durante l'esposizione a temperature più calde.
Il rapido aumento dalle temperature criogeniche dell'azoto liquido a temperature di congelamento più elevate avvia la formazione di cristalli di ghiaccio all'interno della cannuccia criogenica, rischiando di danneggiare gli embrioni. Quando i cristalli di ghiaccio iniziano a formarsi, immergere immediatamente la cannuccia in un bagno d'acqua a temperatura controllata con una leggera agitazione per uno scongelamento uniforme. Questo passaggio rimuove i cristalli di ghiaccio, proteggendo gli embrioni dai danni dei cristalli di ghiaccio.
Rimuovere il tappo della cannuccia. Tagliare l'estremità sigillata della cannuccia; Collegare un microdispenser per rilasciare il contenuto in una piastra di coltura con terreno contenente saccarosio. Il terreno aiuta a rimuovere i crioprotettori dagli embrioni; Il saccarosio evita l'eccessivo gonfiore degli embrioni, ripristinando il loro ambiente fisiologico durante la reidratazione.
Trasferisci gli embrioni in una piastra contenente terreno fresco per rimuovere completamente i crioprotettori, garantendo una reidratazione completa. Gli embrioni scongelati sono pronti per le procedure di trasferimento embrionale.
Per scongelare gli embrioni per un trasferimento, posizionare il ministraw orizzontalmente, a 10 centimetri dal vapore di azoto liquido per 20-30 secondi. Quando inizia il processo di cristallizzazione all'interno del ministero, immergere la cannuccia in un bagno d'acqua a 25 gradi Celsius per 10-15 secondi. Rimuovere immediatamente la cannuccia e i tappi di cotone e utilizzare un microdispenser accoppiato per espellere il contenuto del somministratore in una piastra contenente un terreno di base a 25 gradi Celsius integrato con una soluzione di saccarosio molare 0,33 molari in cui gli embrioni devono rimanere per 5 minuti. Quindi, trasferire gli embrioni in una piastra di terreno di base fresco per un'altra incubazione di 5 minuti.