Trasferimento di embrioni nel coniglio: una procedura per il trasferimento guidato da laparoscopia di embrioni nell'ovidotto del modello di coniglio femmina ricevente in ovulazione

Per eseguire il trasferimento dell'embrione, prendi una cerva coniglio non fecondata. Iniettare nel coniglio per via intramuscolare un analogo sintetico dell'ormone di rilascio delle gonadotropine. Questa procedura induce l'ovulazione e consente al coniglio di mostrare una pseudogravidanza, una condizione in cui il corpo mostra sintomi simili alla gravidanza senza avere un feto vitale, il che aumenta le possibilità di sopravvivenza dell'embrione nelle fasi successive.

Anestetizzare il coniglio e posizionarlo supino, in posizione inclinata con i piedi sollevati sopra la testa. Questa posizione sposta gli organi addominali verso l'alto, garantendo una distanza sufficiente dagli organi riproduttivi. Fai un'apertura nella parte anteriore della regione addominale. Utilizzare quest'area per inserire una telecamera endoscopica all'interno della cavità peritoneale per visualizzare il sistema riproduttivo.

Ora, prendi un gruppo siringa-catetere contenente embrioni vitali. Inserisci l'ago vicino all'ovidotto, un canale che fa passare l'embrione verso l'utero. Far avanzare il catetere attraverso l'estremità della cavità a forma di imbuto o infundibolo fino a raggiungere l'ampolla, una lunga posizione tubolare dell'ovidotto.

Rilasciare gli embrioni nell'ampolla. Ritrarre il catetere e rimuovere la telecamera. Sigillare il sito dell'incisione. Trasferisci il coniglio nella sua gabbia e monitoralo. Gli embrioni migrano dalla regione ampollare verso il corno uterino, la parte dell'utero in cui avviene l'impianto. Gli embrioni sani vengono impiantati, portando alla fine a una gravidanza di successo.

Il giorno del trasferimento, sciacquare gli embrioni freschi o scongelati in un terreno di base a 37 gradi Celsius sotto uno stereomicroscopio e collegare un catetere epidurale calibro 17 opportunamente configurato a una siringa da 1 millilitro. Aspirare un centimetro di terreno basico nel catetere seguito da una piccola bolla d'aria. Quindi, aspirare da 5 a 7 embrioni e 10 microlitri di terreno di base, seguiti da un'altra piccola bolla d'aria in un ultimo centimetro di terreno di base.

Una volta che gli embrioni sono stati caricati, metti un coniglio ricevente anestetizzato in una gabbia su una fase di riscaldamento e applica un unguento sugli occhi dell'animale. Dopo aver confermato la mancanza di risposta al riflesso del pedale, radere il pelo dall'addome ventrale, pulire l'area chirurgica con sapone alla clorexidina gluconato e rimuovere i peli rimanenti.

Coprire l'area con un telo sterile con un foro per l'area chirurgica e inserire un trocar endoscopico di 5 centimetri nella cavità addominale, 2 centimetri caudale al processo xifoideo e utilizzare un insufflatore meccanico che regola la pressione per gonfiare la cavità peritoneale.

Inserire la telecamera dell'endoscopio attraverso il trocar endoscopico e inserire l'ago epidurale calibro 17 nella regione inguinale a 2 o 3 centimetri dall'infundibolo. Inserire il catetere caricato attraverso l'ago epidurale nell'addome e inserire da 1 a 2 centimetri del catetere epidurale attraverso l'infundibolo nell'ampolla.

Premere delicatamente lo stantuffo del catetere per rilasciare gli embrioni nell'ovidotto. Entrambe le bolle d'aria devono uscire dal catetere. Rimuovere il catetere subito dopo che gli embrioni sono stati rilasciati, aspirare e rilasciare il terreno rimanente per confermare l'assenza degli embrioni.

Dopo aver confermato l'avvenuto trasferimento degli embrioni, rimuovere l'ago epidurale e la telecamera dell'endoscopio e rilasciare l'anidride carbonica addominale attraverso il trocar endoscopico. Pulire l'incisione del trocar con una soluzione di clorexidina e chiudere la ferita con un alluminio micronizzato e una medicazione di plastica. Quindi, trattare l'animale con gli antibiotici e gli analgesici appropriati e monitorare l'animale fino al completo recupero.