JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Tecniche Biologiche
0 visualizzazioni • 3:12 min. • July 8th, 2025
Inizia con un modello murino geneticamente modificato che comprende un genoma modificato che ospita siti LoxP - sequenze specifiche riconosciute dagli enzimi Cre-ricombinasi - che fiancheggiano il gene di interesse. Il topo viene ulteriormente trasfettato con un vettore plasmidico che codifica per la ricombinasi CreER organo-specifica, portando all'integrazione dell'elemento che esprime la ricombinasi CreER nel genoma delle cellule epatiche.
La CreER ricombinasi espressa, una proteina di fusione inattiva che coinvolge la Cre ricombinasi e il dominio mutante di legame del ligando del recettore degli estrogeni, ER, interagisce e si lega alla proteina da shock termico nel citoplasma. Questo legame confina la CreER ricombinasi nel citoplasma.
Preparare una soluzione di tamoxifene, un farmaco idrofobo, utilizzando etanolo e olio adatto. Ora, iniettare la soluzione di tamoxifene per via intraperitoneale nel quadrante inferiore sinistro dell'addome del topo per prevenire danni agli organi addominali.
Il tamoxifene iniettato viene metabolizzato nel fegato in 4-idrossitamoxifene, 4-OHT. Inoltre, il 4-OHT, un modulatore selettivo del recettore degli estrogeni, si lega al dominio di legame ER
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