Espressione genica basata su un sistema regolabile inducibile Tet-On in vivo: un sistema di espressione genica indotta da tetraciclina per l'attivazione della trascrizione genica bersaglio in un modello murino

Il sistema tetraciclina-On o Tet-On è un sistema di espressione genica condizionale che attiva l'espressione del gene di interesse in presenza di tetraciclina o del suo analogo, la doxiciclina.

Iniziare con un topo geneticamente modificato con un genoma modificato contenente un gene che codifica per la proteina attivatrice trascrizionale controllata da tetraciclina inversa, o rtTA, guidata da un promotore specifico del fegato nelle cellule epatiche o negli epatociti. Inoltre, il topo contiene un gene di interesse sotto il controllo dell'operatore della tetraciclina o sequenze di tetO situate a monte e fuse selettivamente in un promotore minimo. Il tetO e il promotore sono chiamati elemento responsivo alla tetraciclina, o TRE.

L'rtTA espresso - una proteina di fusione che comprende il repressore tet, il tetR e il dominio di transattivazione VP16 della proteina virale - forma dimeri, che sono inattivi e non possono legarsi alla sequenza tetO del TRE, impedendo l'attivazione dell'espressione genica bersaglio.

Preparare una soluzione contenente doxiciclina e saccarosio. L'aggiunta di saccarosio aumenta l'appetibilità. Dopo il filtraggio, fornire al topo la soluzione di doxiciclina-sacc