Consegna genica basata su virus associato ad adeno ricombinante: una tecnica per la consegna di transgeni e l'espressione cardiaca-specifica in un modello di roditore
JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Tecniche Biologiche
0 visualizzazioni • 3:11 min. • July 8th, 2025
Il virus adeno-associato ricombinante, rAAV, è un piccolo virus a DNA a filamento singolo geneticamente modificato per colpire un tipo di cellula specifico e trasportare il suo carico genetico al nucleo della cellula ospite per l'espressione genica.
Inizia trattenendo un cucciolo di topo crio-anestetizzato. Sterilizzare la pelle posteriore e iniettare per via sottocutanea il vettore rAAV che trasporta il transgene desiderato lungo un promotore cardiaco-specifico. Il vettore viene assorbito nel sistema vascolare e raggiunge organi distanti, compreso il cuore.
Qui, il virus ricombinante si attacca alla superficie del cardiomiocita e viene internalizzato tramite endocitosi in un endosoma. All'interno dell'endosoma, il capside virale si disassembla parzialmente, esponendo le proteine litiche virali. Questa proteina induce pori nella membrana endosomiale, attraverso i quali il vettore fuoriesce nel citoplasma.
Il vettore viaggia attraverso i microtubuli citoplasmatici ed entra attraverso il poro nucleare. Una volta nel nucleo, il capside virale si disassembla per rilasciare il suo genoma. Il DNA a singolo filamento che trasporta il gene bersaglio viene quindi convertito in DNA a doppio
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