JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Tecniche Biologiche
0 visualizzazioni • 2:15 min. • July 8th, 2025
Le nanolame sono particelle sintetiche simili a virus prive del materiale genetico virale incapsulato, il che le rende vettori adatti per il carico straniero nelle cellule ospiti. Queste nanolame sono costruite utilizzando il nucleo retrovirale del virus della leucemia di topo circondato dalla membrana a doppio strato lipidico derivata dalle cellule produttrici eucariotiche utilizzate per assemblare le nanolame in vitro.
Il nucleo contiene l'enzima Cas9 complessato con l'sgRNA specifico per la sequenza del genoma bersaglio. Le proteine del nucleo sono circondate dalle proteine dell'involucro che contengono un dominio transmembrana o TM che passa attraverso il doppio strato lipidico. La TM si lega a un dominio superficiale glicoproteico extracellulare o SU che sporge dal rivestimento a doppio strato.
Per utilizzare le nanolame per l'editing genetico, prendere una coltura di cellule bersaglio aderenti e integrarla con la soluzione nanoblade. Nella coltura, l'SU sporgente di una nanolama riconosce il recettore corrispondente sulla superficie della cellula ospite e si lega ad esso. Ciò porta a modifiche nella struttura del dominio SU, facilitandone il rilascio.
Questi cambiamenti innes
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