Trasformazione genetica mediata da Agrobacterium: un metodo per trasformare geneticamente il genoma del riso tramite Agrobacterium tumefaciens geneticamente modificato

L'Agrobacterium tumefaciens, un batterio patogeno per le piante, può essere geneticamente modificato introducendo un plasmide Ti preparato artificialmente, che trasporta un gene di interesse nel suo DNA di trasferimento o nella regione del T-DNA, e un plasmide helper che trasporta i geni di virulenza o Vir per il trasferimento del T-DNA nelle cellule vegetali.

Per la trasformazione genetica mediata da Agrobacterium, inizia con una giovane infiorescenza di riso e tagliala a pezzetti. Trasferire le talee in un terreno di coltura e incubare per facilitare la crescita delle talee in una massa cellulare indifferenziata chiamata callo.

Ora, trasferire il callo in un mezzo di infiltrazione dell'Agrobacterium contenente acetosiringone, un chemioattrattivo per l'Agrobacterium. Successivamente, aggiungi una coltura di Agrobacterium geneticamente modificato al terreno e incuba brevemente.

Le molecole di acetosiringone attivano la proteina del recettore cellulare - VirA - sulla membrana dell'Agrobacterium, che media ulteriormente la fosforilazione di una proteina attivatrice trascrizionale - VirG. La VirG fosforilata si muove verso il plasmide helper e attiva la trascrizione di una cascata di