Consegna genica in vitro mediata da elettroporazione: una tecnica di impulso elettrico per introdurre plasmidi codificanti proteine reporter fluorescenti in cellule coltivate

Per la somministrazione di DNA plasmidico basata sull'elettroporazione nelle cellule neuronali primarie, iniziare con una sospensione di cellule in un terreno di elettroporazione adatto. Aggiungere il DNA plasmidico codificante una proteina fluorescente per preparare la miscela di elettroporazione.

Trasferire delicatamente la miscela per elettroporazione in una cuvetta per elettroporazione, evitando bolle d'aria che potrebbero influire negativamente sull'efficienza dell'elettroporazione. Trasferire la cuvetta nel supporto della cuvetta dell'elettroportatore; Impostare i parametri di elettroporazione. Avviare l'elettroporazione.

I brevi impulsi elettrici ad alta tensione applicati attraverso la membrana cellulare causano l'accumulo di carica differenziale su entrambi i lati della membrana, aumentando il potenziale transmembrana, la tensione attraverso la membrana cellulare.

Quando il potenziale transmembrana indotto supera il potenziale di rottura del doppio strato lipidico, il doppio strato lipidico si destabilizza con il cambiamento di configurazione localizzato, formando pori idrofili transitori sulla membrana cellulare. I pori di dimensioni adeguate forniscono un percorso per il