JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Tecniche Biologiche
0 visualizzazioni • 3:23 min. • July 8th, 2025
Per fornire plasmidi nei nuclei di sporozoiti mediante nucleofezione, iniziare con una sospensione di sporozoiti isolati e vitali - stadio mobile e infettivo di parassiti - in tampone. Gli sporozoiti sono cellule di forma sottile racchiuse da una membrana plasmatica esterna e da un sottostante complesso di membrana interna costituito da una serie di vescicole appiattite e proteine fondamentali per la stabilità strutturale e la motilità.
Centrifugare la sospensione per pellettizzare gli sporozoiti. Risospendere il pellet di sporozoite in un volume adeguato di tampone di trasfezione nucleare, integrato con plasmidi codificanti proteine fluorescenti. Il tampone di trasfezione nucleare con elevata capacità tampone e forza ionica garantisce una trasfezione efficiente preservando la funzionalità dello sporozoite.
Trasferire la sospensione in una cuvetta a trasfezione nucleare. Posizionare la cuvetta nel supporto di un dispositivo di nucleofezione. Eseguire il programma di nucleofezione appropriato.
Durante la nucleofezione, impulsi brevi e ad alta tensione applicati in modo specifico, insieme ai costituenti tampone, interrompono temporaneamente la membrana plasmatica e il complesso della
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