JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Tecniche Biologiche
0 visualizzazioni • 4:16 min. • July 8th, 2025
Per eseguire la trasfezione, prendere una camera specializzata contenente uova di topo appena fecondate sospese in una goccia di terreno appropriato. In questa fase, l'ovulo contiene un grande ovocita centrale contenente sia i pronuclei paterni che quelli materni.
L'ovocita è ricoperto da una zona pellucida ricca di glicoproteine, circondata da gruppi ravvicinati di cellule cumuliformi incorporate all'interno della matrice extracellulare ricca di acido ialuronico. Ora, tratta le uova con l'enzima ialuronidasi, che digerisce l'acido ialuronico. Questo dissocia le cellule del cumulo, esponendo infine la zona pellucida che circonda l'ovocita.
Posizionare un singolo ovocita trattato vicino alla punta di una pipetta di mantenimento e applicare una pressione di aspirazione per mantenerne la posizione. Prelevare un ago per microiniezione a foro stretto contenente una sospensione ingegnerizzata di vettore lentivirale contenente un transgene incapsulato all'interno dell'involucro virale. Questi retrovirus hanno la capacità intrinseca di integrarsi nel genoma ospite.
Successivamente, perforare l'ago attraverso la zona pellucida per raggiungere lo spazio perivitellino, uno spazio tra la zona
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