Consegna genica lentivirale assistita da laser: una tecnica per permeabilizzare gli ovuli fecondati di topo per facilitare la consegna del gene lentivirale
JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Tecniche Biologiche
0 visualizzazioni • 3:31 min. • July 8th, 2025
La somministrazione genica lentivirale assistita da laser è una tecnica per trasferire un transgene in un sistema ospite.
Per produrre topi transgenici, iniziare con uova fecondate di topo isolate in un terreno di coltura adatto. Posizionare la piastra di coltura contenente ovuli fecondati su un tavolino da microscopio preinstallato con un apparecchio laser e collegato a un software di controllo. Osservare con un ingrandimento adeguato.
Le uova fecondate sono circondate da zona pellucida, uno strato protettivo di glicoproteine che barriera le particelle lentivirali. Per permeare questa barriera, accendere l'apparecchio laser e assicurarsi che il LED del laser sia visibile sopra la zona pellucida. Utilizzando il software di controllo, sparare il laser. Regolare la durata della cottura in base al diametro di perforazione desiderato.
Metti le uova in un'incubatrice per il recupero. Dopo una breve incubazione, rimuovere le uova e aggiungere particelle di lentivirus che trasportano il gene di interesse e un marcatore fluorescente selezionabile.
Con la zona pellucida perforata, il lentivirus si diffonde facilmente verso la membrana della cellula uovo ed entra attraverso l'endocitosi. Il
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