Trasferimento genico mediato da biolistica: una tecnica per fornire un gene di interesse nelle cellule bersaglio tramite una pistola genica biolistica

Iniziare con un volume ottimale di perle d'oro - veicoli di consegna genica biologicamente inerti e non tossici - in una provetta da microcentrifuga. Quindi, aggiungi agenti cationici - spermidina e cloruro di calcio, seguiti dai frammenti di DNA desiderati alle perle d'oro. Muovi delicatamente il tubo e incuba.

Il cloruro di calcio si lega ai frammenti di DNA e ne facilita il rivestimento sulle perle d'oro attraverso i residui di spermidina. Quindi, centrifugare e rimuovere il solvente. Risospendere le perle rivestite di DNA in etanolo. Pipettare delicatamente le perle su un disco macrocarrier sterile. Lasciate asciugare.

Impostare un apparato di pistola genica biolistica comprendente un tubo di accelerazione del gas elio e una camera di bombardamento con un disco di rottura e uno schermo di arresto nelle rispettive fessure. Quindi, capovolgere il disco portamacro e caricarlo sotto il disco di rottura.

Successivamente, posizionare le cellule ospiti bersaglio coltivate in un terreno solido adatto integrato con sorbitolo, uno stabilizzatore osmotico per migliorare l'efficienza della trasformazione. Una volta che la configurazione è pronta, spara con la pistola genetica.

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