Trasduzione genica mediata da retrovirali: una tecnica di trasferimento genico per fornire un transgene in cellule in coltura utilizzando vettori retrovirali ingegnerizzati

Per trasdurre le cellule ospiti con RNA contenente vettori retrovirali, prendere una provetta contenente vettori confezionati in terreni adatti. Ogni vettore contiene un capside virale, contenente il complemento di RNA del transgene da integrare nel genoma dell'ospite e importanti enzimi virali. Un doppio strato lipidico circonda il capside per facilitare l'ingresso nella cellula ospite.

Aggiungere i vettori in presenza di un reagente di trasfezione adatto al pozzetto di una piastra di coltura contenente la sospensione della cellula ospite. Copri il piatto. Centrifugare a bassa velocità per consentire la trasduzione dello spin. Questo avvicina il vettore virale alla superficie della cellula ospite, aumentando l'efficienza di trasduzione.

Contemporaneamente, i policationi nel reagente di trasfezione neutralizzano le cariche negative sul virus e sulla cellula ospite, promuovendo l'adsorbimento virale sulle cellule bersaglio.

Di conseguenza, i recettori sulla superficie del virus facilitano la sua fusione con la membrana ospite. Il capside virale entra nella cellula e si rompe, rilasciando RNA transgenico ed enzimi virali nel suo citoplasma.

All'interno del citoplasma, la trascrittasi