Colorazione di Von Kossa delle cellule muscolari lisce vascolari aortiche: una tecnica in vitro per la valutazione della calcificazione dello strato mediale arterioso

Le cellule muscolari lisce vascolari, o VSMC, sono i componenti cellulari prominenti della tunica media, lo strato intermedio della parete dei vasi sanguigni. In risposta a segnali patologici o all'invecchiamento, queste cellule mediano la calcificazione vascolare, un fenomeno di accumulo di calcio nella matrice extracellulare.

Prelevare una piastra a più pozzetti contenente uno strato aderente di coltura VSMC aortica murina precalcificata. Incubare le cellule con una soluzione di formalina per reticolare le proteine cellulari e stabilizzare la struttura VSMC prima della colorazione.

Iniziare la colorazione di von Kossa aspirando la formalina dal pozzetto e aggiungendo la soluzione di nitrato d'argento. Incubare la piastra sotto una fonte di luce appropriata.

Una volta che la soluzione di nitrato d'argento raggiunge i siti di calcificazione nella matrice extracellulare dello strato VSMC, gli ioni d'argento sostituiscono gli ioni calcio legati al fosfato. Ciò si traduce in una colorazione gialla transitoria. In presenza di materia organica e luce, la degradazione fotochimica del fosfato d'argento provoca la formazione di argento metallico di colore nero.

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