JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Tecniche Biologiche
0 visualizzazioni • 3:14 min. • July 8th, 2025
Per la colorazione specifica del citoplasma cellulare in microambienti dei tessuti molli, ottenere un rene di topo appena raccolto. Trattarlo con una soluzione fissativa contenente formaldeide, acido acetico glaciale e metanolo. Incubare a basse temperature.
La formaldeide penetra nelle cellule, reticolando le proteine alle proteine e le proteine agli acidi nucleici. Il metanolo sposta l'acqua dai tessuti e coagula le proteine. L'acido acetico provoca acidificazione intracellulare e gonfiore dei tessuti, contrastando così il restringimento dei tessuti causato dal metanolo.
La fissazione inattiva gli enzimi e stabilizza la morfologia dei tessuti per la successiva colorazione. Rimuovere i fissativi in eccesso utilizzando il tampone. Incubare il tessuto con eosina Y, un colorante acido.
L'eosina penetra nelle cellule fisse ed entra nel citoplasma. L'ambiente acido del citoplasma, dal trattamento con acido acetico, provoca la massima protonazione dei gruppi amminici delle proteine citoplasmatiche.
L'eosina, con gruppi funzionali caricati negativamente, interagisce elettrostaticamente con gruppi protonati di proteine, formando un complesso colorante-proteina stabile, e colora il citopla
Visualizza la trascrizione completa e accedi a migliaia di video scientifici