JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Tecniche Biologiche
0 visualizzazioni • 4:33 min. • July 8th, 2025
Durante le metastasi del cancro, le cellule tumorali di un tumore primario viaggiano attraverso il sistema circolatorio, stravasano in organi distanti e stabiliscono tumori secondari.
Per valutare le metastasi polmonari in un modello murino di carcinoma mammario a cui sono state iniettate cellule 4T1, cellule di carcinoma mammario altamente metastatico, preparare una sospensione cellulare, comprese le cellule 4T1, isolate dai polmoni raccolti. Centrifugare la sospensione e risospendere le cellule in un terreno contenente 6-tioguanina, 6-TG - un analogo della guanina. Seminare la sospensione cellulare in una piastra di coltura.
Il 6TG entra nelle cellule normali dove l'enzima transferasi specifico lo converte in nucleotide 6-TG, un nucleotide tossico. Questi nucleotidi citotossici vengono incorporati nel DNA, causando danni al DNA, ed eliminano selettivamente le cellule dalla coltura. Le cellule 4T1 hanno una ridotta capacità di formare nucleotidi tossici, facilitando la loro sopravvivenza e aderenza alla piastra. A seconda della capacità proliferativa delle cellule, formano colonie.
Trattare le cellule con metanolo. Il metanolo permeabilizza le cellule e denatura le proteine cellul
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