Colorazione periodica acido-Schiff delle cellule: una tecnica in vitro per rilevare i livelli di glicogeno nelle cellule mononucleate del sangue periferico

Le cellule mononucleate del sangue periferico, o PBMC, sono cellule del sangue circolatorie con nuclei singoli e grandi, comprendenti linfociti B e T, cellule natural killer, monociti e cellule dendritiche. Le PBMC immagazzinano il glucosio in eccesso in forma polimerica come glicogeno - un polisaccaride ramificato - nel loro citoplasma.

Per rilevare la presenza di glicogeno nelle PBMC, preparare uno striscio uniforme di PBMC isolate su un vetrino. Trattare le cellule con formalina, una soluzione fissativa che lega in modo incrociato le biomolecole cellulari, preservando l'integrità strutturale delle PBMC.

Immergere parzialmente il vetrino in una soluzione di amilasi. Questo enzima entra nelle cellule e idrolizza il glicogeno nelle cellule trattate. Ciò si traduce in due distinte popolazioni cellulari: cellule ricche di glicogeno trattate con enzimi, carenti di glicogeno e non trattate con amilasi.

Sovrapponili con una soluzione acida periodica che converte ossidativamente i gruppi ossidrilici delle molecole di glicogeno in aldeidi.

Sciacquare il vetrino in acqua per arrestare la reazione di ossidazione e rimuovere l'eccesso di acido periodico. Trattare il vetrino con il reagente S