Colorazione hFTAA dei depositi di amiloide: una tecnica per visualizzare le fibrille amiloidi utilizzando un colorante a base di oligotiofene per l'imaging a fluorescenza in sezioni di tessuto
JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Tecniche Biologiche
0 visualizzazioni • 3:38 min. • July 8th, 2025
La deposizione di aggregati proteici mal ripiegati - gli amiloidi nello spazio del tessuto extracellulare sono segni distintivi di varie malattie proteopatiche. Queste amiloidi sono composte da fogli beta che si allineano perpendicolarmente all'asse fibrillare, formando ripetizioni incrociate di fogli beta.
Per rilevare i depositi di amiloide con l'acido acetico eptamero-formil tiofene, o hFTAA, colorare, prendere una sezione di tessuto fissata in formalina e inclusa in paraffina contenente depositi di amiloide.
Trattare le sezioni con xilene per deparaffinare il tessuto per migliorare l'accessibilità alla colorazione nei passaggi successivi. Aggiungere alcune gocce della soluzione colorante hFTAA sulla sezione di tessuto e incubare per consentire al colorante di penetrare nel tessuto.
L'hFTAA contiene sette unità di tiofene coniugate contenenti zolfo e gruppi carbossilici terminali attaccati alla spina dorsale del tiofene. Queste caratteristiche forniscono flessibilità al colorante non legato. Durante l'incubazione, i gruppi carbossilici terminali del colorante si legano con i residui di amminoacidi caricati positivamente che rivestono il solco idrofobico del foglietto beta tramit
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