Colorazione TTC di fette di tessuto cerebrale di ratto: una procedura di colorazione per differenziare il tessuto vitale e necrotico in fette di tessuto dopo una lesione da ischemia-riperfusione

Durante l'ischemia cerebrale, l'alterazione del flusso sanguigno al cervello riduce l'apporto di ossigeno e nutrienti ai tessuti, causando danni cerebrali. Dopo una breve ischemia, quando il flusso sanguigno al cervello viene ripristinato, la riperfusione con un aumento dell'apporto di ossigeno provoca una sovrapproduzione di specie ioniche reattive, con conseguente danno ossidativo ai tessuti, noto come danno da ischemia-riperfusione.

Per valutare il danno cerebrale a seguito di danno da ischemia-riperfusione in un modello di ratto, in primo luogo, prelevare il cervello di ratto. Sciacquare in un tampone freddo per rimuovere detriti e sangue. Sezionare il cervello per ottenere fette coronali degli spessori desiderati. Trasferire con cura le fette in un vassoio contenente tampone, con le superfici anteriori rivolte verso l'alto, per la successiva colorazione.

Aggiungere una soluzione di cloruro caldo di trifenil tetrazolio, TTC, un colorante redox solubile in acqua, sulle fette del cervello. Incubare in condizioni di oscurità, poiché il TTC è sensibile alla luce. La TTC entra nelle cellule all'interno della sezione tissutale.

Nelle cellule viventi, l'enzima mitocondriale succinato