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Tecniche Biologiche
0 visualizzazioni • 3:08 min. • July 8th, 2025
Gli osteoclasti sono grandi cellule multinucleate a forma di cupola che si trovano sulla superficie ossea. Queste cellule contengono numerosi granuli citoplasmatici ricchi di fosfatasi acida resistente ai tartrati, o TRAP, un enzima metalloproteico secreto dal bordo arruffato degli osteoclasti nel tessuto osseo. Questo enzima digerisce la matrice extracellulare e dissolve i cristalli minerali, facilitando il riassorbimento osseo.
Per rilevare i granuli TRAP come marcatori citochimici degli osteoclasti, prendere una piastra di coltura contenente osteoclasti aderenti. Aggiungere la soluzione colorante TRAP alle cellule. Questa soluzione comprende il substrato - un derivato del naftolo contenente fosfato e l'acido tartarico in un tampone integrato con un sale di diazonio.
Aggiungere acido acetico a questa soluzione per mantenere il pH acido necessario per la colorazione TRAP. Incubare le cellule al buio a temperatura fisiologica per un'attività ottimale dell'enzima TRAP.
La soluzione colorante entra negli osteoclasti, dove l'acido tartarico inibisce l'attività idrolizzante delle fosfatasi acide sensibili ai tartrati in altre cellule.
Allo stesso tempo, TRAP idrolizza il substrato aggi
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