Colorazione con rosso di alizarina: una tecnica per visualizzare la mineralizzazione da parte di osteoblasti in coltura

Gli osteoblasti sono cellule che formano le ossa e secernono piccole vescicole nella loro matrice extracellulare, la MEC. Queste vescicole, chiamate vescicole della matrice, sono dotate di trasportatori di membrana ed enzimi che consentono l'ingresso di ioni calcio e fosfato, formando cristalli minerali all'interno. Man mano che i cristalli si accumulano, sfondano la membrana della vescicola per formare noduli mineralizzati nella MEC, che costituiscono la densità minerale ossea.

Per visualizzare la mineralizzazione, iniziare con le cellule degli osteoblasti su un'impalcatura biocompatibile in un mezzo di crescita adatto. Gli osteoblasti si attaccano all'impalcatura e utilizzano i fattori di crescita del mezzo per secernere vescicole della matrice che successivamente formano noduli mineralizzati nella MEC.

Aspirare il terreno di coltura e sciacquare le cellule per rimuovere eventuali tracce. Trattare le cellule con una soluzione di formalina, che induce la reticolazione, il fissaggio e la conservazione della struttura tissutale da parte della MEC. Lavare le cellule per rimuovere eventuali residui di formalina.

Quindi, aggiungi la soluzione colorante di Alizarin Red e incuba la coltu