Colorazione con argento di glicosaminoglicani solfatati: un metodo di colorazione per la visualizzazione di glicosaminoglicani solfatati in gel di poliacrilammide

I glicosaminoglicani solfatati, GAG, sono polisaccaridi lineari lunghi, caricati negativamente, con catene unitarie disaccaridiche ripetute solfatate in posizioni distinte, esistenti in lunghezze variabili.

Per visualizzare GAG solfatati isolati di interesse che differiscono per lunghezza della catena in un gel di poliacrilammide dopo l'elettroforesi, rimuovere con cura il gel dalla sua cassetta. Risciacquare con acqua deionizzata, rimuovendo i pezzi di gel attaccati che potrebbero interferire con la colorazione.

Trattare con una soluzione acida di blu di Alciano. In condizioni acide, il blu di Alcian, un colorante cationico polivalente con un atomo di rame al centro, interagisce specificamente con i GAG solfatati caricati negativamente tramite interazioni ioniche, formando un complesso insolubile in acqua di colore blu intenso.

Lavare il gel con acqua deionizzata e metanolo, rimuovendo ogni macchia residua. Incubare il gel con una soluzione alcalina di nitrato d'argento. In condizioni alcaline, i GAG solfatati legati al blu di Alcia forniscono siti per gli ioni d'argento caricati positivamente per legarsi e formare complessi.

Trattare il gel in una soluzione di sviluppo contenente