Colorazione di Giemsa per il saggio di formazione di colonie: una procedura di colorazione in vitro per valutare la capacità proliferativa delle cellule staminali mesenchimali

I saggi di formazione di colonie misurano la capacità proliferativa delle cellule di crescere in colonie.

In primo luogo, seminare una sospensione cellulare derivata dal midollo osseo comprendente eritrociti e cellule mononucleate, comprese le cellule staminali mesenchimali o MSC, in terreni su una piastra di coltura e incubare. Le MSC aderiscono al fondo della piastra mentre gli eritrociti e le cellule mononucleate rimangono in sospensione e vengono scartate.

Aggiungere nuovi terreni contenenti fattori di crescita per supportare la sopravvivenza delle MSC. A seconda del loro potenziale proliferativo individuale, le MSC si replicano per formare colonie.

Quindi, trattare le colonie con metanolo. Il metanolo permeabilizza le cellule, sposta l'acqua dall'ambiente intracellulare e denatura le proteine, preservando l'architettura cellulare.

Incubare le colonie fissate con la soluzione colorante Giemsa, una miscela di prodotti di ossidazione del blu di metilene, principalmente l'azzurro B, un colorante basico, e l'eosina Y, un colorante acido. Dopo la diffusione nelle cellule, i dimeri B azzurri caricati positivamente si legano tramite intercalazione al DNA caricato negativamente nel nuc