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Tecniche Biologiche
0 visualizzazioni • 2:49 min • July 8th, 2025
La fibrosi è un aumento della deposizione di collagene fibrillare nella matrice extracellulare del tessuto danneggiato. Strutturalmente, comprende catene polipeptidiche di collagene a tripla elica.
Per colorare il collagene con il colorante rosso picrosirius, prendere una sezione di tessuto cardiaco fissata con paraformaldeide e inclusa in paraffina. Immergere la sezione di tessuto nello xilene - un solvente organico - per sciogliere la cera circostante.
Trattare in sequenza il tessuto deparaffinizzato con concentrazioni decrescenti di alcol per sostituire lo xilene. Immergere il tessuto in acqua per reidratarlo per una migliore visualizzazione delle macchie nei passaggi successivi.
Immergere il tessuto in una soluzione di rosso picrosirio contenente rosso di Sirio - un colorante azoico anionico - e acido picrico.
Il rosso Sirio contiene gruppi solfonici acidi che interagiscono con i gruppi amminici basici di lisina, idrossilisina e arginina presenti nel collagene. L'acido picrico aiuta a mantenere il pH acido, facilitando il legame delle molecole di colorante in un orientamento parallelo con il collagene.
Sciacquare i vetrini in una soluzione decolorante acidificata per rimuovere la macchia in eccesso. Mettere una goccia di mezzo di montaggio sul vetrino e osservarlo con un microscopio a campo chiaro.
L'area fibrotica contenente collagene appare di colore rosso vivo rispetto alle regioni non fibrotiche di colore giallo.
Dopo aver fissato il tessuto cardiaco, posizionarlo su un dispositivo di sezionamento dei tessuti, tagliarlo a fette spesse 2 millimetri e posizionare le sezioni in una cassetta di inclusione.
Dopo l'inclusione della paraffina e il sezionamento aggiuntivo secondo il protocollo di testo, deparaffinare i vetrini mettendoli in un serbatoio con xilene per 30 minuti. Quindi, reidratare il tessuto in una serie di alcol diluito in sequenza, seguito da acqua distillata.
Successivamente, utilizzare un'adeguata soluzione di rosso picrosirius per coprire completamente le sezioni di tessuto e incubare per un'ora. Quindi, utilizzare una soluzione di acido acetico allo 0,5% per sciacquare i vetrini due volte e sciacquare i campioni due volte in alcool assoluto.
Asciugare i campioni all'aria e montarli in resina sintetica con un vetrino coprioggetti. Quindi, utilizzare la luce visibile al microscopio con un ingrandimento di 200X per visualizzare i vetrini.