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Tecniche Biologiche
0 visualizzazioni • 2:30 min. • July 8th, 2025
Nelle piante, la lignina - un biopolimero complesso - si deposita tipicamente nelle pareti cellulari dei tessuti per fornire supporto.
La lignificazione si trova prevalentemente negli ispessimenti secondari della parete cellulare delle cellule xilematiche conduttrici d'acqua, come vasi e fibre, e nelle cellule extra-xilari, come le fibre interfascicolari.
Strutturalmente, la lignina è composta da precursori di monolignoli reticolati. Questi alcoli aromatici polimerizzano, formando una struttura molto ramificata. Questa caratteristica aumenta la resistenza e la rigidità della pianta.
Per visualizzare la deposizione di lignina utilizzando la colorazione Wiesner, prendere le sezioni trasversali dello stelo di dicotiledone incorporate nell'agarosio derivate dalla parte centrale o inferiore della pianta. Aggiungerli a una provetta da microcentrifuga contenente un tampone adatto.
Aggiungere la soluzione colorante preparata, che contiene il floroglucinolo acidificato e l'etanolo, alle sezioni dello stelo. Gli alcoli presenti nella lignina reagiscono con il floroglucinolo e l'etanolo per produrre un pigmento rosa. Ciò si traduce nello sviluppo di una colorazione rosa corrispondente alla deposizione di lignina nelle pareti cellulari di cellule specializzate.
Ora, trasferisci la sezione colorata su un vetrino microscopico. Posizionare delicatamente un vetrino coprioggetti sulla sezione, evitando bolle, per facilitare la visualizzazione. Visualizza le sezioni al microscopio ottico.
La colorazione rosa nelle cellule xilematiche specializzate e le fibre interfascicolari nelle sezioni trasversali dello stelo confermano la presenza di lignina in questi tessuti.
Per la colorazione con floroglucinolo, trasferire le sezioni dello stelo in una provetta da microcentrifuga. Aggiungere 1 millilitro della soluzione di floroglucinolo al tubo e tapparlo immediatamente perché l'acido cloridrico nella macchia di floroglucinolo è altamente corrosivo. Muovere delicatamente il tubo per assicurarsi che tutte le sezioni siano macchiate. Pipettare delicatamente le sezioni in una punta di pipetta tagliata e su un vetrino da microscopio. Copri le sezioni con un vetrino coprioggetti. Osservare le sezioni in condizioni di illuminazione a campo chiaro. La soluzione si asciuga in 5-10 minuti causando un deterioramento dei campioni, pertanto l'imaging deve essere completato entro tale periodo di tempo.