Colorazione del maule per la lignina: una tecnica per caratterizzare la distribuzione della lignina nelle sezioni dello stelo di Arabidopsis thaliana

0 visualizzazioni2:44 min • July 8th, 2025

La lignina è un importante componente strutturale della parete cellulare delle piante. È un polimero composto principalmente da alcoli siringilici, o unità S-lignina, e alcoli guaiacilici, o unità G-lignina e una popolazione minore di alcoli para-cumarilici chiamati unità H-lignina.

Il contenuto di S-lignina differisce in vari tessuti vegetali secondari. Si trova principalmente nei vasi e nelle fibre xilari e nelle fibre interfascicolari, dove fornisce supporto strutturale.

Per rilevare la presenza di S-lignina, prendere le sezioni trasversali dello stelo di dicotiledone incorporate nell'agarosio in un tubo. Trattare le sezioni dello stelo in sequenza con una soluzione colorante di permanganato di potassio, seguita da acido cloridrico diluito e, infine, con idrossido di ammonio, una base debole.

Durante questo trattamento, la porzione di S-lignina presente nella parete cellulare subisce una serie di modifiche per generare infine un prodotto che appare rosso.

L'intensità della colorazione rossa è inferiore nelle cellule xilematiche a causa della presenza di meno S-lignina rispetto alle fibre interfascicolari, che appaiono di un rosso più intenso. Trasferire le sezioni su un vetrino e visualizzarle al microscopio ottico.

La variazione dell'intensità del rosso aiuta a capire il rapporto relativo della S-lignina nei tessuti vegetali lignificati.

Per la colorazione del Maule, trasferire le sezioni dello stelo in una provetta da microcentrifuga. Aggiungere 1 millilitro della soluzione di permanganato di potassio allo 0,5% nella provetta contenente le sezioni. Pipettare la soluzione di permanganato di potassio allo 0,5% su e giù delicatamente, preferibilmente senza disturbare le sezioni.

Dopo un'incubazione di 2 minuti e la ripetizione del pipettaggio, lasciare riposare la provetta per microcentrifuga fino a quando tutte le sezioni non si sono stabilizzate. Utilizzando una pipetta da 1 millilitro, estrarre 700 microlitri di soluzione di permanganato di potassio allo 0,5%. Aggiungere 700 microlitri di acqua distillata per sciacquare il permanganato di potassio. Ripeti tre o quattro volte o fino a quando la soluzione acquosa rimane limpida.

Dopo aver scartato l'acqua, aggiungere rapidamente 1 millilitro di acido cloridrico al 3% fino a quando il colore marrone intenso non viene scaricato dalle sezioni. Questo può accadere entro 3-5 minuti o può richiedere due lavaggi di 5 minuti ciascuno. Pipettare tutta la soluzione di acido cloridrico al 3% e aggiungere immediatamente 1 millilitro di soluzione concentrata di idrossido di ammonio prima di eseguire l'imaging in condizioni di luce intensa.

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Ultimo aggiornamento: 22 agosto 2026