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Tecniche Biologiche
0 visualizzazioni • 2:44 min • July 8th, 2025
La lignina è un importante componente strutturale della parete cellulare delle piante. È un polimero composto principalmente da alcoli siringilici, o unità S-lignina, e alcoli guaiacilici, o unità G-lignina e una popolazione minore di alcoli para-cumarilici chiamati unità H-lignina.
Il contenuto di S-lignina differisce in vari tessuti vegetali secondari. Si trova principalmente nei vasi e nelle fibre xilari e nelle fibre interfascicolari, dove fornisce supporto strutturale.
Per rilevare la presenza di S-lignina, prendere le sezioni trasversali dello stelo di dicotiledone incorporate nell'agarosio in un tubo. Trattare le sezioni dello stelo in sequenza con una soluzione colorante di permanganato di potassio, seguita da acido cloridrico diluito e, infine, con idrossido di ammonio, una base debole.
Durante questo trattamento, la porzione di S-lignina presente nella parete cellulare subisce una serie di modifiche per generare infine un prodotto che appare rosso.
L'intensità della colorazione rossa è inferiore nelle cellule xilematiche a causa della presenza di meno S-lignina rispetto alle fibre interfascicolari, che appaiono di un rosso più intenso. Trasferire le sezioni su un vetrino e visualizzarle al microscopio ottico.
La variazione dell'intensità del rosso aiuta a capire il rapporto relativo della S-lignina nei tessuti vegetali lignificati.
Per la colorazione del Maule, trasferire le sezioni dello stelo in una provetta da microcentrifuga. Aggiungere 1 millilitro della soluzione di permanganato di potassio allo 0,5% nella provetta contenente le sezioni. Pipettare la soluzione di permanganato di potassio allo 0,5% su e giù delicatamente, preferibilmente senza disturbare le sezioni.
Dopo un'incubazione di 2 minuti e la ripetizione del pipettaggio, lasciare riposare la provetta per microcentrifuga fino a quando tutte le sezioni non si sono stabilizzate. Utilizzando una pipetta da 1 millilitro, estrarre 700 microlitri di soluzione di permanganato di potassio allo 0,5%. Aggiungere 700 microlitri di acqua distillata per sciacquare il permanganato di potassio. Ripeti tre o quattro volte o fino a quando la soluzione acquosa rimane limpida.
Dopo aver scartato l'acqua, aggiungere rapidamente 1 millilitro di acido cloridrico al 3% fino a quando il colore marrone intenso non viene scaricato dalle sezioni. Questo può accadere entro 3-5 minuti o può richiedere due lavaggi di 5 minuti ciascuno. Pipettare tutta la soluzione di acido cloridrico al 3% e aggiungere immediatamente 1 millilitro di soluzione concentrata di idrossido di ammonio prima di eseguire l'imaging in condizioni di luce intensa.
In questo articolo si discute il significato della lignina, in particolare della lignina di tipo S, nelle pareti cellulari vegetali e del suo ruolo nel fornire sostegno strutturale. Vengono descritte una metodica di colorazione per visualizzare la lignina S nei tessuti vegetali e le differenze di intensità tra vari tipi cellulari.
La caratterizzazione quantitativa della distribuzione della lignina nei tessuti vegetali è fondamentale per i team biofarmaceutici che progettano caratteristiche della biomassa o ottimizzano le proprietà delle materie prime. La tecnica di colorazione di Maule consente una visualizzazione precisa della localizzazione della lignina siringile (S-lignina), supportando la scoperta basata su ipotesi e la riduzione del rischio meccanicistico nei flussi di ricerca e sviluppo basati sulle piante. Questa capacità informa la validazione precoce degli obiettivi e la selezione del portafoglio per programmi di miglioramento delle caratteristiche.
Il protocollo di colorazione di Maule si integra nelle fasi iniziali di scoperta e di screening dei flussi di lavoro per l'ingegneria dei tratti vegetali, fungendo da ponte tra la verifica delle ipotesi e la fenotipizzazione quantitativa.
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Ultimo aggiornamento: 22 agosto 2026