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Tecniche Biologiche
0 visualizzazioni • 2:19 min. • July 8th, 2025
La cellulosa è un polimero non ramificato di unità di β-glucosio legate da un legame β-1→4 e disposte parallelamente tramite legami idrogeno intermolecolari.
La cellulosa funge da principale componente strutturale della parete cellulare delle piante, fornendo forma e rigidità alle cellule e facilitando la crescita e lo sviluppo delle piante. La proporzione di cellulosa all'interno della parete cellulare varia in modo significativo all'interno della pianta, a seconda del tipo di cellula e dello stadio di crescita.
Per visualizzare la deposizione di cellulosa nello stelo, prendere sottili sezioni trasversali di sezioni di stelo incorporate nell'agarosio.
Aggiungere il colorante fluorescente rosso Congo e incubare le sezioni.
Le molecole di rosso Congo entrano nella parete cellulare e formano legami idrogeno con i gruppi ossidrilici della cellulosa, venendo così adsorbite sul polimero. Questo conferisce un colore rosso all'epidermide, alla corteccia e al midollo.
Le molecole di colorante si diffondono anche all'interno delle complesse pareti cellulari dello xilema e delle fibre interfascicolari, attraversando la barriera rigida della lignina, conferendo così un colore rosso anche a questi tessuti.
Ora, sciacquare le sezioni in acqua per rimuovere la macchia in eccesso. Trasferire le sezioni su un vetrino da microscopio e posizionare un vetrino coprioggetti.
Quando visualizzati al microscopio a fluorescenza, l'epidermide, la corteccia, il midollo centrale, lo xilema e le fibre interfascicolari appaiono rosse, corrispondenti al loro contenuto di cellulosa.
Per la colorazione Congo Red, trasferire le sezioni dello stelo in una provetta da microcentrifuga e aggiungere 1 millilitro della soluzione di Congo Red allo 0,5%. Pipettare delicatamente la soluzione di rosso Congo allo 0,5% su e giù, senza disturbare le sezioni, prima di incubare e lavare le sezioni come descritto nel protocollo di testo. Pipettare delicatamente le sezioni in una punta di pipetta tagliata e su un vetrino da microscopio, quindi coprirle con un vetrino coprioggetti. Osservare i campioni sul vetrino del microscopio sotto eccitazione della luce blu utilizzando un filtro di emissione a 560 nanometri.