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Tecniche Biologiche
0 visualizzazioni • 2:37 min • July 8th, 2025
Nelle cellule vegetali, la parete cellulare, uno strato protettivo specializzato, circonda la membrana plasmatica. La parete cellulare è composta prevalentemente da cellulosa, un polisaccaride lineare e non ramificato di monomeri di glucosio legati end-to-end tramite legami glicosidici β-1, 4.
La cellulosa esiste allo stato aggregato sotto forma di microfibrille di cellulosa disposte ortogonalmente, incorporate in una matrice di emicellulosa, pectina e proteine.
Alcune cellule, come quelle del tessuto xilematico vascolare e delle fibre interfascicolari, includono anche la lignina, un agente indurente, nelle loro pareti cellulari.
Per visualizzare la deposizione di cellulosa nelle pareti cellulari delle piante, iniziare con le sezioni trasversali incorporate nell'agarosio di uno stelo di pianta dicotiledone in tampone. Aggiungere una soluzione acquosa di calcofluor white, un colorante planare chemiofluorescente. Incubare per consentire al colorante di diffondersi nel tessuto.
Una volta all'interno, il calcofluor bianco attraverso i suoi gruppi funzionali ossidrilici interagisce e forma legami idrogeno con i gruppi ossidrilici dei monomeri di glucosio nella cellulosa. Questo porta il colorante in prossimità della cellulosa e favorisce ulteriori interazioni di van der Waals, portando a un complesso stabile colorante-cellulosa.
Trasferire le sezioni dello stelo su un vetrino e montare un vetrino coprioggetti. Sotto l'illuminazione a luce ultravioletta, le molecole di colorante legate alla cellulosa emettono una fluorescenza di un bianco brillante.
Le cellule dell'epidermide, della corteccia e del midollo mostrano un'intensa fluorescenza, con contorni della parete cellulare chiaramente delimitati, a causa dell'alto contenuto di cellulosa. In confronto, le cellule dello xilema e le fibre interfascicolari emettono una fluorescenza debolmente, suggerendo probabilmente una diffusione inadeguata del colorante a causa della presenza di lignina.
Per la colorazione bianca del calcofluor, trasferire le sezioni dello stelo in una provetta da microcentrifuga e aggiungere un millilitro della soluzione bianca di calcofluor allo 0,02%. Pipettare delicatamente la soluzione su e giù. Procedere all'incubazione e lavare le sezioni come descritto nel protocollo di testo prima di osservare le sezioni sotto la luce UV.