JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Tecniche Biologiche
0 visualizzazioni • 3:22 min. • July 8th, 2025
La cromatografia di interazione idrofobica calcio-dipendente è una tecnica per separare le proteine leganti il calcio da altre proteine non leganti il calcio in un campione.
Per iniziare, prendere una colonna cromatografica preassemblata contenente una matrice di perle di agarosio reticolate derivatizzate con gruppi fenilici idrofobici per facilitare le interazioni con le proteine bersaglio. Equilibrarlo con un tampone legante contenente un'altissima concentrazione di ioni calcio per la massima interazione tra resina e proteina bersaglio durante il successivo caricamento del campione.
Prelevare un campione contenente la miscela proteica dializzata e integrarlo con una concentrazione di cloruro di calcio uguale a quella utilizzata nel tampone legante per l'equilibrio della colonna. In questo modo si massimizza il legame delle proteine alla colonna.
Gli ioni calcio si legano a specifiche proteine nel lisato, inducendo un cambiamento conformazionale in queste molecole proteiche esponendo le loro regioni idrofobiche.
Filtrare la miscela per separare le impurità e gli aggregati per evitare che ostruiscano la colonna. Caricare questo filtrato nella colonna pre-equilibrata. Le proteine co
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