Purificazione del baculovirus basata sulla cromatografia di affinità con eparina: una tecnica per isolare il baculovirus dal surnatante delle cellule di insetto

I baculovirus - virus a DNA a doppio filamento - sono circondati da un involucro contenente le principali glicoproteine virali, come la GP64.

Per isolare i baculovirus da un surnatante di coltura cellulare contenente detriti cellulari e proteine contaminanti, assemblare una colonna cromatografica di affinità con eparina contenente una matrice di perle di agarosio reticolate. Queste perle sono accoppiate all'eparina, un polisaccaride lineare con gruppi solfato, che conferiscono una carica negativa alla catena dell'eparina.

Equilibrare la colonna con un tampone di lavaggio a pH neutro e forza ionica ottimale per fornire condizioni favorevoli per le massime interazioni tra baculovirus ed eparina durante il carico del surnatante. Caricare il surnatante contenente baculovirus sulla colonna.

Gli amminoacidi basici del baculovirus GP64 facilitano le interazioni elettrostatiche aspecifiche con l'eparina caricata negativamente e si legano strettamente alla colonna, a differenza dei contaminanti che si legano liberamente. Sciacquare la colonna con un tampone di lavaggio, rimuovendo le proteine e i detriti contaminanti non legati e debolmente legati.

Far passare un tampone di eluizione con un