Cromatografia liquida con interazione idrofila: una tecnica per separare gli analiti polari idrofili utilizzando perle idrofile

La cromatografia liquida con interazione idrofila, HILIC, è una tecnica per separare i composti polari idrofili in base al loro grado di polarità. Iniziare installando una colonna HILIC piena di perle idrofile che trasportano gruppi funzionali polari.

Innanzitutto, condizionare la colonna utilizzando un tampone di equilibrio e una fase mobile, una miscela di solvente organico e acqua. Le molecole tampone stabilizzano il pH, mentre il solvente organico satura la colonna. Le molecole d'acqua si immobilizzano e creano uno strato acquoso sopra le perle idrofile.

Caricare il campione contenente una miscela di glicani - composti polari idrofili - etichettati con un'etichetta fluorescente. Far scorrere il campione utilizzando un gradiente di fase mobile attraverso la colonna a una velocità di flusso ottimale.

Mentre il campione si muove lungo la fase mobile idrofobica, i glicani migrano nello strato acquoso, lasciando dietro di sé le impurità. Successivamente, i glicani si spostano verso i gruppi funzionali polari sulle perline. Qui, più glicani polari si legano fortemente, mentre quelli meno polari si legano liberamente.

Quando l'idrofobicità della fase mobile diminuisce, i glicani debol